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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教用PVDF膜做western的朋友
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宜室宜家

新虫 (初入文坛)
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7楼: Originally posted by lzhwin at 2008-12-01 14:33:22
恒压也试过了，100V一个小时 冰盒降温，并且跑胶时点了预染marker。结果，转完膜预染marker既没在膜上也没在胶上，立春红染色，也只有很淡的几条带。个人觉得还是PVDF膜没有处理好。
我是按handbook上做的啊：甲醇 ...

楼主，我最近遇到了和您同样的问题，请问您最后是怎么解决的？谢谢！
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11楼2015-08-05 16:18:13
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by leilaye at 2012-02-16 15:29:53
甲醇质量不好会影响吗？
不过丽春红染了，条带清晰，就是34kd到43kd一段好像很少蛋白。。...

甲醇质量一定要保证

有的批号确实不好使   换一个就好了。
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12楼2015-08-05 22:09:50
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witty319

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以100 mA 恒流湿转，每半个小时，停下来，看看，预染marker有没有转到膜上去。
我用的伯乐的大点的电转仪，100 mA，30 min刚刚好，60 kDa的蛋白刚好转过去。
另外，电转液不加SDS。每800 ml是2.9 g甘氨酸，5.8g Tris，另外加200 ml甲醇。

祝成功。
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13楼2015-08-06 00:16:49
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