| 查看: 4539 | 回复: 12 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
lzhwin木虫 (正式写手)
|
[交流]
请教用PVDF膜做western的朋友 已有5人参与
|
||
|
近来开始学做western，没想到居然会卡到转膜这一步。 我用的是PVDF膜，开始几次怎么都转不出来原因分析如下： 前两次认为是没有事先用纯甲醇浸泡，结果立春红S染色空无一物，而且滤纸剪的太大怀疑短路了 第三次PVDF在甲醇里泡了15秒，然后又在含20%甲醇的转膜液中泡了至少10分钟，滤纸比膜小、膜比胶3小。结果立春红还是什么都没染出来。 第四次换用NC膜，正常转膜、膜比胶稍大一点、滤纸比膜小，染出了条带 第五次PVDF在甲醇里泡了3分钟，转膜液里至少15分钟，转完仍然什么都染不出来，绝望下又在甲醇里泡了1分钟，再染色，出了条带。 第六次条件基本同第五次，只是转膜时间比第五次长了一个小时（中间吃饭去了），结果却重复不出第五次的结果，继续向下作ECL显色也没有压出条带。 真是快疯了，为什么在我这里PVDF膜这么难伺候，不都说PVDF膜比NC膜贵也比NC膜好吗？为什么我连转膜这事情都搞不定？大家救救我吧！ PS：转膜是正负极绝对没有搞错 没有条带的意思是什么都没有，包括marker以及各种高丰度蛋白，统统没有 转膜的条件是200mA恒流1小时（加冰盒降温），当然具体操作起来时间会有点出入。看不到恒流时的电压值。 后面几次转过膜的凝胶都重新做过考马斯亮蓝染色，凝胶上已经看不到条带。 个人认为膜上什么都没有肯定是关键步骤出了问题，但是到底是哪里呢？郁闷的是我染成功过现在却重复不了了，长一个小时应该不会让蛋白全部穿过PVDF膜吧？ |
回复此楼» 猜你喜欢
国自然评审意见
已经有8人回复
-
国自然面上复盘~欢迎讨论
已经有14人回复
-
系统查不到
已经有11人回复
-
有多少人是今天查系统知道结果的？
已经有18人回复
-
为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难
已经有12人回复
-
有没有仍没收到信息的
已经有3人回复
-
导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！
已经有8人回复
-
基金不中，共勉
已经有11人回复
-
麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上）
已经有9人回复
-
2026年叶企孙基金
已经有6人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 将透明薄膜做成白色膜。。。。请教各位
已经有29人回复
- PVDF膜在水中浸泡后，水中会生成一些白色絮状的膜，请教下
已经有13人回复
- 怎样给PVDF膜亲水改性啊？
已经有17人回复
- 请教大家用作压电的PVDF在哪能买到？
已经有6人回复
- PVDF膜 的曝光问题
已经有14人回复
- 【交流】请问PVDF膜，NC膜，以及尼龙膜他们的透明液分别是什么
已经有3人回复
- 【求助/交流】western的pvdf膜和NC膜有什么区别？
已经有4人回复
- 【求助/交流】纯化酶切后的膜蛋白做Western blot没条带，why？
已经有9人回复
- 【交流】PVDF成膜问题
已经有79人回复
- western blot 半干转膜后，发现条带个别缺失，不知道什么原因，请教各位
已经有1人回复
- 【请教】怎样做石墨烯纸或膜？
已经有50人回复
- 【求助】请教PVDF有机滤膜与PVDF生物转印膜的区别？
已经有5人回复
10楼2012-02-16 15:29:53
ZOU0000
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 15534.9
- 红花: 2
- 帖子: 1322
- 在线: 111.2小时
- 虫号: 440812
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 环境化学
2楼2008-11-27 20:09:28
lzhwin
木虫 (正式写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 1977.1
- 散金: 3
- 红花: 2
- 帖子: 489
- 在线: 58.1小时
- 虫号: 481076
- 注册: 2007-12-17
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
3楼2008-11-27 21:53:05
wangjiasi
木虫 (正式写手)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 2382.9
- 散金: 120
- 红花: 4
- 帖子: 346
- 在线: 737.9小时
- 虫号: 450308
- 注册: 2007-11-04
- 性别: GG
- 专业: 生化分析及生物传感
4楼2008-12-01 00:06:19
投票:
30