| 查看: 858 | 回复: 0 | ||
ss2007jj银虫 (初入文坛)
|
[求助]
大肠BL21中eGFP荧光蛋白不亮---RBS位点选择的是AGGG
|
|
大家好，我最近在构建一个组成型的启动子在非大肠中表达荧光蛋白， 启动子我选择了两个，一个是J5噬菌体启动子，另一个是文献中的组成型启动子， RBS位点我也选择了两组，第一组是文献报道中的AGGG（顺序是：启动子+6个碱基+AGGG+8个碱基+eGFP），第二组是根据RBS calculater这个网站根据我的目的菌株设计的RBS序列，长度在30bp左右（RBS序列为GCGAGCGCGATCATTCTATTAGGGAGGGAGGT）。 我打算构建好质粒，先化转到大肠，然后测序确认再去电转入我的目的菌株。 现在问题来了，化转进入大肠BL21后，以上四组实验我并没有看到菌株产生荧光的现象，紫外线下激发也是没有任何现象。 我想问一下就是： 是不是因为大肠中不支持AGGG这个RBS位点，而必须是AGGA这个RBS位点呢，AGGG位点的这个质粒必须电转入我的目的菌株才有荧光现象呢？ 谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
碳青霉烯类抗生素为何需联用西司他丁钠？ | Biochempartner
已经有0人回复
-
源自蕨类植物的抗炎美白活性分子去甲氧基荚果蕨素 | Biochempartner
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有83人回复
-
肠道里的"代谢开关"：Fexaramine用肠道限制性重新定义 FXR 激动剂
已经有0人回复
-
DMXAA：从血管破坏剂到STING通路研究的关键工具分子 | Biochempartner
已经有0人回复
-
靶向PD-L1的人源化单克隆抗体阿特珠单抗
已经有0人回复
-
"探针之父"(+)-JQ-1如何改变表观遗传研究 | Biochempartner
已经有0人回复
-
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复