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ss2007jj银虫 (初入文坛)
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大肠BL21中eGFP荧光蛋白不亮---RBS位点选择的是AGGG
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大家好,我最近在构建一个组成型的启动子在非大肠中表达荧光蛋白, 启动子我选择了两个,一个是J5噬菌体启动子,另一个是文献中的组成型启动子, RBS位点我也选择了两组,第一组是文献报道中的AGGG(顺序是:启动子+6个碱基+AGGG+8个碱基+eGFP),第二组是根据RBS calculater这个网站根据我的目的菌株设计的RBS序列,长度在30bp左右(RBS序列为GCGAGCGCGATCATTCTATTAGGGAGGGAGGT)。 我打算构建好质粒,先化转到大肠,然后测序确认再去电转入我的目的菌株。 现在问题来了,化转进入大肠BL21后,以上四组实验我并没有看到菌株产生荧光的现象,紫外线下激发也是没有任何现象。 我想问一下就是: 是不是因为大肠中不支持AGGG这个RBS位点,而必须是AGGA这个RBS位点呢,AGGG位点的这个质粒必须电转入我的目的菌株才有荧光现象呢? 谢谢! |
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