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ss2007jj银虫 (初入文坛)
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[求助]
大肠BL21中eGFP荧光蛋白不亮---RBS位点选择的是AGGG
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大家好，我最近在构建一个组成型的启动子在非大肠中表达荧光蛋白， 启动子我选择了两个，一个是J5噬菌体启动子，另一个是文献中的组成型启动子， RBS位点我也选择了两组，第一组是文献报道中的AGGG（顺序是：启动子+6个碱基+AGGG+8个碱基+eGFP），第二组是根据RBS calculater这个网站根据我的目的菌株设计的RBS序列，长度在30bp左右（RBS序列为GCGAGCGCGATCATTCTATTAGGGAGGGAGGT）。 我打算构建好质粒，先化转到大肠，然后测序确认再去电转入我的目的菌株。 现在问题来了，化转进入大肠BL21后，以上四组实验我并没有看到菌株产生荧光的现象，紫外线下激发也是没有任何现象。 我想问一下就是： 是不是因为大肠中不支持AGGG这个RBS位点，而必须是AGGA这个RBS位点呢，AGGG位点的这个质粒必须电转入我的目的菌株才有荧光现象呢？ 谢谢！ |
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