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新虫 (初入文坛)


[交流] 体内外生物发光试验荧光素试剂的制备

体外生物发光试验荧光素试剂的制备
材料
—D-萤火虫荧光素,钾盐,sciencelight luc001(1.0克/瓶)
—无菌水
—完全培养基
步骤
1. 用无菌水制备200X荧光素原液(30mg/ml),轻轻颠倒摇动至荧光素完全溶解。混匀后立即使用或分装后-20℃冻存。
*提示:可以用33.3 mL蒸馏水溶解1.0 g D-荧光素钠盐,配制成100 mM的储存液(200×,浓度30mg/ml)。也可以按实验需要量进行配置。
2. 将D-Lucirerin溶解于预热好的组织培养基中制备成浓度为150 μg/ml的工作液。用组织培养基1∶200稀释储存液,配置工作液(终浓度150μg/mL)。
3. 去除培养细胞的培养基。
4. 图像分析前,向细胞培养板中添加1×荧光素工作液,然后进行图像分析。
—注射器滤膜过滤除菌,0.2 μ m
*提示:成像前在37℃下对细胞进行短时间孵育可增强信号。

体内生物发光试验荧光素试剂的制备
材料
—D-荧光素,钾盐 sciencelight luc001(1.0克/瓶)
—无菌PBS,w/o Mg2+、Ca2+
—注射器滤膜过滤除菌,0.2 μ m
步骤
用无菌PBS配制D-荧光素钾盐工作液(15mg/mL),0.2 um滤膜过滤除菌。
按10 uL/g剂量,给予150mg/kg荧光素工作液。(例如,10g的小鼠注射100 μl工作液,被给予1.5mg荧光素。)
腹腔注射荧光素10-15 min后进行成像分*。
    * 需要对每个动物模型做荧光素动力学研究以确定峰值信号获取时间。

体内外生物发光试验荧光素试剂的制备
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