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饿的神啊

新虫 (著名写手)

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[求助] ClaI和XhoI双酶切连接的问题已有1人参与

ClaI和XhoI双酶切连接一直不成功，分别插入T-载体双酶切，没有连接成功，后来把小片段的反向互补序列插入T-载体，也没有连接成功。通过查资料，发现ClaI的GATC是个甲基化位点，识别位点（G）ATCGAT（C）前面如果是G或者后面是C则会被甲基化，需要用甲基化缺陷的Ecoli菌株，可问题是我发现我的引物是这样的CC ATCGAT CGAAAGCTCGTCAGGGT，酶切位点和引物在一起正好构成甲基化位点，这样的话换甲基化缺陷的Ecoli菌株可以解决问题吗？已经折腾快一个月了，急求帮助！

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