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wangxuan

木虫 (著名写手)

[交流] 我做PCR遇到的奇怪现象,请各位高手帮忙分析一下

我的一个PCR片段大概2.7kb,做胶回收的时候,在加样的电泳泳道看不到条带,反而溢出到旁边的那个泳道里面的一点能跑出来,这是什么原因?请各位高手指点一下。不胜感激

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-30 at 10:47 ]
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在其位,谋其政,成其事
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lxlxyc

铜虫 (小有名气)

你检测时有带是吧?请问一下你的PCR产物隔了多长时间才回收?
2楼2008-11-27 08:17:47
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luckydog52

木虫 (著名写手)

觉得是制胶的时候除了问题,建议再做一块儿胶试试
自信源于一次次成功的积累
3楼2008-11-28 11:20:36
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oligoarray

铁杆木虫 (正式写手)

小木蟲書記

有可能是制胶时,well没做好,或拔胶太快,导至well!破洞,样品外漏,另外就是加样时可能加得太快而外溢至其它的well.但不应该在主well看不到样本。
<<<<<<<今日你帮助别人,明日别人帮助你>>>>>>>
4楼2008-11-28 11:43:08
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shining-rose

金虫 (小有名气)

除了做的胶有问题外,还有就是建议把电泳缓冲液也换新配的,做回收一定要换新的缓冲液。
5楼2008-11-28 14:33:35
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zhangyuyue2006

金虫 (正式写手)

有可能你加入loading buffer后混匀不好,loading buffer比重相对较大,结果溢出来的是你的目的条带
6楼2008-11-29 12:43:55
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wangxuan

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by lxlxyc at 11/27/08  08:17:
你检测时有带是吧?请问一下你的PCR产物隔了多长时间才回收?

我是pcr结束马上就回收的
在其位,谋其政,成其事
7楼2008-11-29 20:48:58
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longfeng

金虫 (小有名气)

可能你就没有扩出条带,其泳道可能是制胶和点样时污染造成的
8楼2008-11-29 23:31:32
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lxlxyc

铜虫 (小有名气)

你的PCR结束时没有先取小量进行检测一下就直接回收是吧?那可能楼上说的对,你没有扩出目的条带,旁边未加样的泳道有条带,可能是缓冲液用的太久了有污染
9楼2008-11-30 09:26:59
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caoqishu

铜虫 (初入文坛)


孔破了,以前我也出现过,你在加样时先加一点看看,是否漏孔了。
10楼2009-02-22 16:33:56
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