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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 我做PCR遇到的奇怪现象，请各位高手帮忙分析一下
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wangxuan

木虫 (著名写手)

[交流] 我做PCR遇到的奇怪现象，请各位高手帮忙分析一下

我的一个PCR片段大概2.7kb，做胶回收的时候，在加样的电泳泳道看不到条带，反而溢出到旁边的那个泳道里面的一点能跑出来，这是什么原因？请各位高手指点一下。不胜感激

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-30 at 10:47 ]
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1楼 2008-11-26 21:24:49
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lxlxyc

铜虫 (小有名气)
你检测时有带是吧？请问一下你的PCR产物隔了多长时间才回收？
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2楼2008-11-27 08:17:47
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luckydog52

木虫 (著名写手)
觉得是制胶的时候除了问题，建议再做一块儿胶试试
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自信源于一次次成功的积累
3楼2008-11-28 11:20:36
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oligoarray

铁杆木虫 (正式写手)

小木蟲書記
有可能是制胶时，well没做好，或拔胶太快，导至well!破洞，样品外漏，另外就是加样时可能加得太快而外溢至其它的well.但不应该在主well看不到样本。
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<<<<<<<今日你帮助别人，明日别人帮助你>>>>>>>
4楼2008-11-28 11:43:08
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shining-rose

金虫 (小有名气)
除了做的胶有问题外，还有就是建议把电泳缓冲液也换新配的，做回收一定要换新的缓冲液。
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5楼2008-11-28 14:33:35
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zhangyuyue2006

金虫 (正式写手)
有可能你加入loading buffer后混匀不好，loading buffer比重相对较大，结果溢出来的是你的目的条带
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6楼2008-11-29 12:43:55
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wangxuan

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by lxlxyc at 11/27/08  08:17:
你检测时有带是吧？请问一下你的PCR产物隔了多长时间才回收？

我是pcr结束马上就回收的
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在其位，谋其政，成其事
7楼2008-11-29 20:48:58
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longfeng

金虫 (小有名气)
可能你就没有扩出条带，其泳道可能是制胶和点样时污染造成的
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8楼2008-11-29 23:31:32
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lxlxyc

铜虫 (小有名气)
你的PCR结束时没有先取小量进行检测一下就直接回收是吧？那可能楼上说的对，你没有扩出目的条带，旁边未加样的泳道有条带，可能是缓冲液用的太久了有污染
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9楼2008-11-30 09:26:59
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caoqishu

铜虫 (初入文坛)
孔破了，以前我也出现过，你在加样时先加一点看看，是否漏孔了。
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10楼2009-02-22 16:33:56
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