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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 多糖纯化，关于过阴离子柱子，先用纯水再用盐洗时，用什么检测器
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stantontang

金虫 (小有名气)

[求助] 多糖纯化，关于过阴离子柱子，先用纯水再用盐洗时，用什么检测器 已有1人参与

多糖只能用示差检测器，但是示差检测器不能进行梯度洗脱

求打什么告知多糖用阴离子柱子DEAE-cellulose分离时，用什么检测器如何做到梯度洗脱的啊？
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1楼 2016-10-11 10:16:31
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月亮追老虎

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
苯酚-硫酸法，没必要买检测器。
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2楼2016-10-11 22:28:11
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stantontang

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 月亮追老虎 at 2016-10-11 22:28:11
苯酚-硫酸法，没必要买检测器。

你意思就是直接用一柱体积水洗洗完再换氯化钠洗，分别收集？
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3楼2016-10-12 21:17:56
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月亮追老虎

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by stantontang at 2016-10-12 21:17:56
你意思就是直接用一柱体积水洗洗完再换氯化钠洗，分别收集？...

不一定是一个柱体积，边收集边通过苯酚-硫酸法实验在Excell上作图，当峰走到基线平时是变可以改变梯度，如0、0.1、0.2、0.5、0.75、1 M的NaCl洗脱，至每个梯度洗几个柱体积，要看同时做图来判断，不同样品不一样，通常3-5柱体积便可以，如水洗3BV、0.1M NaCl洗5BV、0.2MNaCl洗3BV等。若以前过过其他柱子，这个问题很容易理解。
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4楼2016-10-12 23:15:02
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神雕哥

木虫 (正式写手)
可以用紫外检测器，你用阴离子交换柱分离酸性多糖的话，酸性多糖含有羧基，会在210左右有末端吸收，我之前就是这么做的也分离得到了样品，不放心的话可以用苯酚硫酸法验证峰位组分就可以了，至于示差一般是液相纯度

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5楼2016-10-13 12:08:08
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stantontang

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 月亮追老虎 at 2016-10-12 23:15:02
不一定是一个柱体积，边收集边通过苯酚-硫酸法实验在Excell上作图，当峰走到基线平时是变可以改变梯度，如0、0.1、0.2、0.5、0.75、1 M的NaCl洗脱，至每个梯度洗几个柱体积，要看同时做图来判断，不同样品不一样， ...

非常感谢，这些我理解，只是有时看到最后收集还要分离出样品，觉得每次就上几十毫克的样，最后分出来需要太久的时间
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6楼2016-10-26 19:26:09
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月亮追老虎

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by stantontang at 2016-10-26 19:26:09
非常感谢，这些我理解，只是有时看到最后收集还要分离出样品，觉得每次就上几十毫克的样，最后分出来需要太久的时间...

是的，很麻烦！过DEAE可以用粗柱子，我一般上8-10克样品，3周左右过完；若不纯再上凝胶。
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7楼2016-10-26 20:03:20
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stantontang

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 月亮追老虎 at 2016-10-26 20:03:20
是的，很麻烦！过DEAE可以用粗柱子，我一般上8-10克样品，3周左右过完；若不纯再上凝胶。...

请问您用过阴离子柱子分离吧？ DEAE Sephadex A-50和DEAE 纤维素52有多大区别？实验室有A-50没有纤维素52，不知道这两者会不会很大差别，因为看别人文献都是纤维素52

3周过8-10g?
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8楼2016-10-28 15:07:27
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月亮追老虎

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by stantontang at 2016-10-28 15:07:27
请问您用过阴离子柱子分离吧？ DEAE Sephadex A-50和DEAE 纤维素52有多大区别？实验室有A-50没有纤维素52，不知道这两者会不会很大差别，因为看别人文献都是纤维素52

3周过8-10g?...

我用的是 DEAE 52，没用过DEAE Sephadex A-50，个人觉得DEAE Sephadex A-50可能除了有离子交换，更重要也有分子筛作用，应该分离效果更好，不一定正确，仅供参考。我3周过8-10克，指的是粗样，分离结束后量大的馏分可能也只有1克左右，不同样品差别很大。
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9楼2016-11-01 00:06:53
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shtxmq

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 月亮追老虎 at 2016-11-01 00:06:53
我用的是 DEAE 52，没用过DEAE Sephadex A-50，个人觉得DEAE Sephadex A-50可能除了有离子交换，更重要也有分子筛作用，应该分离效果更好，不一定正确，仅供参考。我3周过8-10克，指的是粗样，分离结束后量大的馏分 ...

用多少克 DEAE 52可以装2.6*40cm的柱子？
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10楼2016-11-10 13:46:59
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