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泡泡熊123

铜虫 (小有名气)

[求助] 单菌落PCR出现了2条带是为什么? 已有7人参与

我自己纯化的细菌单菌落,提DNA,通用引物,PCR后检测,可是为什么会出现2条带呢?第二条带一般是由于什么原因引起的呢?Marker是2000的。求各位大神指教?

单菌落PCR出现了2条带是为什么?
2016-10-08,DNA-pcr,DH L1-4.jpg
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梦想天行

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能菌落污染或引物不好非特异性条带!

发自小木虫Android客户端
2楼2016-10-08 22:30:43
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bio转录组

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能是非特异性条带,你可以提高一下退火温度试试
生活活生生累死
3楼2016-10-09 11:15:12
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泡泡熊123

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by bio转录组 at 2016-10-09 11:15:12
可能是非特异性条带,你可以提高一下退火温度试试

这就是提高后的
4楼2016-10-09 17:16:57
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泡泡熊123

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 梦想天行 at 2016-10-08 22:30:43
可能菌落污染或引物不好非特异性条带!

也就是说在我纯化的单菌落,纯化不完全,可能存在2种菌?
5楼2016-10-09 17:18:42
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梦想天行

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 泡泡熊123 at 2016-10-09 17:18:42
也就是说在我纯化的单菌落,纯化不完全,可能存在2种菌?...

嗯,有这个可能的,但非特异性条带可能更大!

发自小木虫Android客户端
6楼2016-10-09 17:59:55
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泡泡熊123

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 梦想天行 at 2016-10-09 17:59:55
嗯,有这个可能的,但非特异性条带可能更大!
...

那怎么才能去除呢?求指教
7楼2016-10-10 21:11:17
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queen3511

铜虫 (小有名气)

要想图漂亮,那就换对引物。只要结果的话,那就直接去测序,测序正确就没问题啦

发自小木虫Android客户端
8楼2016-10-10 22:07:55
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夜风嫣然

新虫 (正式写手)

9楼2016-10-10 22:27:15
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这就是非特异性条带,如果说是污染的条带大小是一样的,电泳看不出,测序是双峰;继续提供退火温度;或者切胶回收测序
帮助虫友,提升自己
10楼2016-10-11 09:24:03
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