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wuqianqian

新虫 (初入文坛)

[求助] pet28a重组质粒双酶切,pmd19t重组质粒双酶切 已有1人参与

10ul酶切体系:28a 质粒1是maker 2xhol单酶切 3xhol和Ndel双酶切,4目的基因 5是Ndel单酶切
pmd19t质粒 6maker 7xhol 8xhol和ndel 9目的基因 10Ndel
单酶切条带很奇怪
250bp的maker
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pet28a重组质粒双酶切,pmd19t重组质粒双酶切


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wuqianqian

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by mould at 2016-10-08 10:16:05
质粒加的太多了,检测用3ul左右就够了,或者酶切的时间短,单酶切后多条带是酶切不彻底,而且你pmd19双酶切后两条目的条带应该是杂带吧?建议你做个pcr检测下,同时做好阴性对照。
...

谢谢

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6楼2016-10-10 19:24:29
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mould

金虫 (小有名气)

钻石

1你没有对连有目的基因的pet28a的条带进行跑胶,2你单酶切的不彻底,3酶切体系不宜过大。

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人生没有如果,却有很多但是!
2楼2016-10-07 20:31:20
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wuqianqian

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by mould at 2016-10-07 20:31:20
1你没有对连有目的基因的pet28a的条带进行跑胶,2你单酶切的不彻底,3酶切体系不宜过大。

酶跑胶,我只测了浓度73.4ng/ul。酶切体系10ul,质粒加了8ul, takara酶0.5ul。

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3楼2016-10-07 22:38:33
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mould

金虫 (小有名气)

钻石

引用回帖:
3楼: Originally posted by wuqianqian at 2016-10-07 22:38:33
酶跑胶,我只测了浓度73.4ng/ul。酶切体系10ul,质粒加了8ul, takara酶0.5ul。
...

质粒加的太多了,检测用3ul左右就够了,或者酶切的时间短,单酶切后多条带是酶切不彻底,而且你pmd19双酶切后两条目的条带应该是杂带吧?建议你做个pcr检测下,同时做好阴性对照。

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人生没有如果,却有很多但是!
4楼2016-10-08 10:16:05
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