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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 新手，第一次用T4连接酶，求问怎么用的！！
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qhiv6

新虫 (小有名气)

[交流] 新手，第一次用T4连接酶，求问怎么用的！！ 已有13人参与

想问一下体系，还有反应的温度时间，还有加ATP怎么加，加多少，以前用的诺维赞的一次克隆试剂盒连载体连不上，想试一下别的连接酶！先谢过各位大神了！！

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1楼 2016-10-02 10:52:29
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qhiv6

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by firefly22 at 2016-10-06 12:03:28
诺唯赞一次克隆试剂盒是单片段克隆C112么？这个试剂盒要注意以下几点哦：1.载体及目的片段的大小分别是50bp-10kb，引物设计很重要，2.两者的配比 最后就是感受态了。祝好运哦
...

引物设计没问题，不知道哪一步出错了，就是连不上，产品里带的阳性对照组长的比较好，说明酶和感受态都是没有问题的，然而自己提纯的载体和目的片段就出了问题，提出来的浓度不高，有时候平板里一个菌都不会长，不知道是什么原因！

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22楼2016-10-07 13:20:15
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qhiv6

新虫 (小有名气)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-10-04 08:11:15
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-10-02 12:57:49
按说明书操作

说明书没有体系，只有反应时间

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3楼2016-10-03 08:08:02
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010308Jing

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-04 08:11:23
T4连接酶不需要ATP啊

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4楼2016-10-03 12:20:21
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闲来小译

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-04 08:11:29
官网有体系可以看
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5楼2016-10-03 23:44:20
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