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qhiv6

新虫 (小有名气)

[交流] 新手,第一次用T4连接酶,求问怎么用的!! 已有13人参与

想问一下体系,还有反应的温度时间,还有加ATP怎么加,加多少,以前用的诺维赞的一次克隆试剂盒连载体连不上,想试一下别的连接酶!先谢过各位大神了!!

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qhiv6

新虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by firefly22 at 2016-10-06 12:03:28
诺唯赞一次克隆试剂盒是单片段克隆C112么?这个试剂盒要注意以下几点哦:1.载体及目的片段的大小分别是50bp-10kb,引物设计很重要,2.两者的配比 最后就是感受态了。祝好运哦
...

引物设计没问题,不知道哪一步出错了,就是连不上,产品里带的阳性对照组长的比较好,说明酶和感受态都是没有问题的,然而自己提纯的载体和目的片段就出了问题,提出来的浓度不高,有时候平板里一个菌都不会长,不知道是什么原因!

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22楼2016-10-07 13:20:15
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qhiv6

新虫 (小有名气)

xn8008: 欢迎发帖交流 2016-10-04 08:11:15
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-10-02 12:57:49
按说明书操作

说明书没有体系,只有反应时间

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3楼2016-10-03 08:08:02
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010308Jing

木虫 (正式写手)

★ ★
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xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-04 08:11:23
T4连接酶不需要ATP啊

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4楼2016-10-03 12:20:21
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闲来小译

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-04 08:11:29
官网有体系可以看
5楼2016-10-03 23:44:20
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