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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 新手，第一次用T4连接酶，求问怎么用的！！
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qhiv6

新虫 (小有名气)

[交流] 新手，第一次用T4连接酶，求问怎么用的！！ 已有13人参与

想问一下体系，还有反应的温度时间，还有加ATP怎么加，加多少，以前用的诺维赞的一次克隆试剂盒连载体连不上，想试一下别的连接酶！先谢过各位大神了！！

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1楼 2016-10-02 10:52:29
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mwang307

木虫 (正式写手)
★
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4楼: Originally posted by 010308Jing at 2016-10-03 12:20:21
T4连接酶不需要ATP啊

错。需要ATP的，buffer里提供
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纵有沧桑真冷暖温柔镜里梦难留
26楼2016-10-08 15:21:50
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普通回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-10-04 08:11:03
xn8008: 金币+1, 应助指数+1 2016-10-04 08:11:08
按说明书操作
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2楼2016-10-02 12:57:49
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qhiv6

新虫 (小有名气)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-10-04 08:11:15
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-10-02 12:57:49
按说明书操作

说明书没有体系，只有反应时间

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3楼2016-10-03 08:08:02
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010308Jing

木虫 (正式写手)
★ ★
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xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-04 08:11:23
T4连接酶不需要ATP啊

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4楼2016-10-03 12:20:21
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闲来小译

金虫 (正式写手)
★ ★
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xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-04 08:11:29
官网有体系可以看
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5楼2016-10-03 23:44:20
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010308Jing

木虫 (正式写手)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-10-04 22:38:43
一般T4连接酶好像有两种，一种是噬菌体的，平末端和黏性末端都可以连；一种是细菌的，只能连接粘性末端

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6楼2016-10-04 09:24:04
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hucuiyao

新虫 (小有名气)
★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-10-04 22:37:41
建议计算一下浓度比，在转成体积比。我们做多按DNA:T=3:1,摩尔比。

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yichongweiban
7楼2016-10-04 17:21:41
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华理一学渣

新虫 (初入文坛)
★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-10-04 22:38:16
连接载体跟DNA片段?我记得16度条件下，过夜就OK了，注意载体和DNA片段的摩尔比，要控制在某个范围，
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8楼2016-10-04 19:36:13
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ttszero

新虫 (小有名气)
★ ★
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xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-07 09:04:34
xn8008: 应助指数+1 2016-10-07 09:04:43
t4不好用，那个takara的solution1系列

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9楼2016-10-04 19:58:25
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willzhuu
★
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xn8008: 欢迎发帖交流 2016-10-07 09:04:48
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10楼2016-10-04 20:17:26
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