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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 新手，第一次用T4连接酶，求问怎么用的！！
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qhiv6

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by pf790352975 at 2016-10-06 15:50:21
你连多大的片段呢？   要看你是什么公司的T4酶了，不同公司连接体系和时间会有区别。

目的片段1000，载体5000

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21楼2016-10-07 13:17:16
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qhiv6

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by firefly22 at 2016-10-06 12:03:28
诺唯赞一次克隆试剂盒是单片段克隆C112么？这个试剂盒要注意以下几点哦：1.载体及目的片段的大小分别是50bp-10kb，引物设计很重要，2.两者的配比 最后就是感受态了。祝好运哦
...

引物设计没问题，不知道哪一步出错了，就是连不上，产品里带的阳性对照组长的比较好，说明酶和感受态都是没有问题的，然而自己提纯的载体和目的片段就出了问题，提出来的浓度不高，有时候平板里一个菌都不会长，不知道是什么原因！

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22楼2016-10-07 13:20:15
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qhiv6

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by firefly22 at 2016-10-06 12:03:28
诺唯赞一次克隆试剂盒是单片段克隆C112么？这个试剂盒要注意以下几点哦：1.载体及目的片段的大小分别是50bp-10kb，引物设计很重要，2.两者的配比 最后就是感受态了。祝好运哦
...

两个的配比是按照说明书上的接近最优的配比来的

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23楼2016-10-07 13:21:07
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匿名

用户注销 (著名写手)
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24楼2016-10-07 21:02:04
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qhiv6

新虫 (小有名气)
引用回帖:
24楼: Originally posted by pf790352975 at 2016-10-07 21:02:04
这种小片段很好连的  比较简单...

两个月，没连上，找不到原因

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25楼2016-10-08 10:44:38
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mwang307

木虫 (正式写手)
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4楼: Originally posted by 010308Jing at 2016-10-03 12:20:21
T4连接酶不需要ATP啊

错。需要ATP的，buffer里提供
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纵有沧桑真冷暖温柔镜里梦难留
26楼2016-10-08 15:21:50
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一笑中

铜虫 (正式写手)
★
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10ul或15ul体系，加1ul，16℃过夜即可

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27楼2016-10-08 16:19:28
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010308Jing

木虫 (正式写手)
引用回帖:
26楼: Originally posted by mwang307 at 2016-10-08 15:21:50
错。需要ATP的，buffer里提供...

额，没注意到

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28楼2016-10-08 16:35:46
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010308Jing

木虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
26楼: Originally posted by mwang307 at 2016-10-08 15:21:50
错。需要ATP的，buffer里提供...

嗯嗯，想明白了，是需要的，要ATP提供能量

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29楼2016-10-08 16:39:46
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