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董先生1234

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助大神 已有3人参与

所需目的条带1020,但总是扩不出来,退火温度57,35个循环,如图,求大神指点!这跑出来的是什么鬼?新人,勿喷啊!

求助大神


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双鱼座的瓶盖

金虫 (小有名气)

★ ★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-01 07:37:07
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-03 07:13:15
增加循环数试试吧,

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2楼2016-09-30 22:24:05
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水凝无痕

新虫 (初入文坛)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-03 07:13:22
3楼2016-10-01 09:04:25
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过烟云烟

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-10-01 22:51:23
引物二聚体,用touch down或者梯度pcr吧,再有就是换新引物了

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once you've accepted your flaws, no one can use them against you.
4楼2016-10-01 09:29:13
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yuy111

银虫 (正式写手)


【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-03 07:13:32
It is primer dimmer, check the template quality and quantity, check with positive control. Check primer sequence, GC %and size etc.
5楼2016-10-02 09:15:08
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79377

新虫 (初入文坛)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-03 07:13:39
引物二聚体,引物设计不是很理想,导致引物与模板配对的特异性下降,考虑提高退火温度,或者重新设计引物,或者加入DMSO做为pcr增强剂试试看

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6楼2016-10-03 07:01:45
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

底下的带是引物二聚体的带,一般都会有的,不是什么大问题,你可以增加退火温度试试,或者做个剃度pcr优化一下条件,如果还是不行的话,就重新设计一下引物

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···
7楼2016-10-05 09:07:17
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