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kuaile5420

专家顾问 (著名写手)

[求助] 细胞转染求助!SOS

最近做细胞转染,24孔板时转染siRNA 24h后提RNA,RT-qPCR检测抑制效率在80%左右,但是换成6孔板铺板转染,相同条件(试剂比例进行同比例放大)下检测抑制效率时只有50%,大打折扣,也重复了几次还是这样。不知道大家是否遇到类似的情况呢?
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ysk1989

新虫 (小有名气)


我也遇到过这种情况,我换了一下转染试剂,结果还是很满意的,是英格恩生物的RNA转染试剂,专门针对siRNA转染,纳米聚合物材料,转染效率高,细胞毒性低,你可以试一下。
2楼2016-10-08 14:05:12
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kuaile5420

专家顾问 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ysk1989 at 2016-10-08 14:05:12
我也遇到过这种情况,我换了一下转染试剂,结果还是很满意的,是英格恩生物的RNA转染试剂,专门针对siRNA转染,纳米聚合物材料,转染效率高,细胞毒性低,你可以试一下。

嗯嗯,谢谢哈,不过后来根据提取的RNA浓度我更倾向与认为是细胞生长速度导致了转染效率差,后面要在实验验证下是不是这个原因,还是谢谢你。
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3楼2016-10-08 14:20:42
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匿名

用户注销 (著名写手)

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4楼2016-10-08 22:49:37
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Flieish411

新虫 (初入文坛)

您好我想问一个很简单的问题。转染24h,是需要很准确的24h吗,还是说在24h左右就可以?作为一个跟着师姐做实验的本科生,因为实验室条件有限,不小心错过了提RNA的时间[大概比以前的晚了4小时左右],现在凑合提了但是好忐忑

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5楼2017-05-22 16:49:05
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kuaile5420

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引用回帖:
5楼: Originally posted by Flieish411 at 2017-05-22 16:49:05
您好我想问一个很简单的问题。转染24h,是需要很准确的24h吗,还是说在24h左右就可以?作为一个跟着师姐做实验的本科生,因为实验室条件有限,不小心错过了提RNA的时间[大概比以前的晚了4小时左右],现在凑合提了 ...

一般情况影响不大,自己做好实验记录。

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坚持到底就是胜利!
6楼2017-05-22 17:41:37
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muyangnan

新虫 (初入文坛)

7楼2017-05-22 20:03:04
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yeyuemei

新虫 (初入文坛)

楼主您好,同做转染,请问24孔板用什么试剂盒提取RNA呀?我能查到的一般试剂盒都需要20-50万细胞
8楼2023-05-23 20:58:11
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kuaile5420

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引用回帖:
8楼: Originally posted by yeyuemei at 2023-05-23 20:58:11
楼主您好,同做转染,请问24孔板用什么试剂盒提取RNA呀?我能查到的一般试剂盒都需要20-50万细胞

传统的方法即可,Trizol裂解,酚氯仿抽提,加上糖原沉淀。
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9楼2023-05-25 17:13:47
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