24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 468  |  回复: 4
当前主题已经存档。

sunmaocai

铜虫 (小有名气)

[交流] 关于酶切酶连

请问pcdna3.1经HindIII和KpnI酶切后是平端还是粘段啊?我做酶连怎么连不起来啊?

[ Last edited by 350784478 on 2009-11-6 at 20:39 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

都是黏端
首先确认,是否酶切完全
再次才是确认连接反应有无问题
我用NEB的内切酶,1ug pcDNA加1U酶反应1小时,电泳验证酶切完全
用TOYOBO的ligation high Ver 2,反应30min连接完全
2楼2008-11-24 12:57:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
sunmaocai(金币+2,VIP+0): g
确认酶切是否完全,可以分别单酶切,然后跑电泳,看看质粒是否完全线性化了

确认是否连接上,首先在保证感受态的转化效率(转空质粒)以及酶切完全的前提下,看看重组子有没有长出菌来,没长就是连接不上。
3楼2008-11-24 12:59:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

回复你的站内信

提质粒之后一般会有几条带,分别是不同构型的,但是用酶切线性化之后,就只剩一条带
因此只要同时跑酶切前后的质粒一看就知道是否酶切完全了
4楼2008-11-24 13:47:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

继续回你站内信……其实发贴就好了,无需站内信

你刚刚抽提出来的空质粒不会都是线性化的吧,不同构型的质粒在琼脂糖胶中,即使分子量一样,位置也会不一样,总之,酶切之后就是线性化的,只要你的空质粒不是已经线性化的就能看出差别
5楼2008-11-24 14:08:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sunmaocai 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿南师大0703化学 275求调剂 +4 Ripcord上岸 2026-03-27 4/200 2026-03-27 17:00 by zhyzzh
[考研] 材料292调剂 +12 橘颂思美人 2026-03-23 12/600 2026-03-27 15:44 by caszguilin
[考研] 308求调剂 +6 墨墨漠 2026-03-27 6/300 2026-03-27 15:20 by caszguilin
[考研] 339求调剂 +4 烤麦芽 2026-03-27 5/250 2026-03-27 13:23 by 752105528
[考研] 考研调剂 +10 呼呼?~+123456 2026-03-24 10/500 2026-03-27 11:46 by wangjy2002
[考研] 材料学硕,求调剂 6+5 糖葫芦888ll 2026-03-22 10/500 2026-03-27 08:18 by hypershenger
[考研] 343求调剂 +4 赠我一本书 2026-03-23 4/200 2026-03-27 00:40 by wxiongid
[考研] 349求调剂 +5 杰斯塔里斯 2026-03-21 5/250 2026-03-27 00:31 by wxiongid
[考研] 327求调剂 +7 prayer13 2026-03-23 7/350 2026-03-26 20:48 by 不吃魚的貓
[考研] 329求调剂 +5 1() 2026-03-22 5/250 2026-03-26 20:40 by fmesaito
[考研] 286求调剂 +13 Faune 2026-03-21 13/650 2026-03-26 19:52 by peike
[考研] 生物学学硕,一志愿湖南大学,初试成绩338 +4 YYYYYNNNNN 2026-03-26 4/200 2026-03-26 19:00 by macy2011
[考研] 297求调剂 +6 田洪有 2026-03-26 6/300 2026-03-26 15:55 by 不吃魚的貓
[考研] 281求调剂 +6 Koxui 2026-03-24 7/350 2026-03-26 15:37 by 无际的草原
[考研] 打过很多竞赛,085406控制工程300分,求调剂 +3 askeladz 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:08 by 给你你注意休息
[考研] 一志愿南航 335分 | 0856材料化工 | GPA 4.07 | 有科研经历 +6 cccchenso 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:25 by 544594351
[考研] 【2026考研调剂】制药工程 284分 求相关专业调剂名额 +4 袁奂奂 2026-03-25 8/400 2026-03-25 14:32 by lbsjt
[考研] 一志愿国科过程所081700,274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 求调剂院校信息 +6 CX 330 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:25 by 无懈可击111
信息提示
请填处理意见