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aoda123

木虫 (正式写手)

[求助] 蛋白表达 已有1人参与

使用pET-SUMO载体在BL21（DE3）中表达目的蛋白，低温，常温，37度条件下都没目的蛋白表达

     但是，使用pQE80L载体表达同样的蛋白，三种条件下都能大量表达，但是都是包涵体表达，不好纯化

    请问，怎么提高pET-SUMO载体的表达效率呢？
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身体健康，工作顺利
1楼 2016-09-27 16:11:14
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李俊超

新虫 (初入文坛)
这个载体我不是很了解，我去帮你问问别人吧

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2楼2016-09-29 07:42:45
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rhjilio

新虫 (小有名气)
我还没做到这步，想问问你连接目地基因到PET28a载体时，你是怎么连接成功的？

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3楼2016-09-29 09:10:54
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sunnypanda

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-09-30 22:58:43
我的蛋白在BL21里面表达 37度时候包涵体几乎全部是；但是低温16-18度诱导表达 时间可以稍稍长一点 上清里面占60%
建议低温 延长时间至16h
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4楼2016-09-29 10:26:51
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aoda123

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sunnypanda at 2016-09-29 14:26:51
我的蛋白在BL21里面表达 37度时候包涵体几乎全部是；但是低温16-18度诱导表达 时间可以稍稍长一点 上清里面占60%
建议低温 延长时间至16h

用过16度过夜，依然是包涵体表达
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身体健康，工作顺利
5楼2016-09-30 19:34:08
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aoda123

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by rhjilio at 2016-09-29 13:10:54
我还没做到这步，想问问你连接目地基因到PET28a载体时，你是怎么连接成功的？

酶切，T4酶在4度过夜连接
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身体健康，工作顺利
6楼2016-09-30 19:35:13
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hya1968


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7楼2016-09-30 19:44:02
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匿名

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8楼2017-08-18 09:33:13
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aoda123

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 欣玲99 at 2017-08-18 13:33:13
你好，我也想用pet-sumo表达蛋白，我在北京，不知可不可以给一点呀

我已经不在北京了，抱歉

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身体健康，工作顺利
9楼2017-08-18 13:37:43
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匿名

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10楼2017-08-18 14:12:10
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