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aoda123

木虫 (正式写手)

[求助] 蛋白表达 已有1人参与

使用pET-SUMO载体在BL21(DE3)中表达目的蛋白,低温,常温,37度条件下都没目的蛋白表达

     但是,使用pQE80L载体表达同样的蛋白,三种条件下都能大量表达,但是都是包涵体表达,不好纯化

    请问,怎么提高pET-SUMO载体的表达效率呢?
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身体健康,工作顺利
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李俊超

新虫 (初入文坛)

这个载体我不是很了解,我去帮你问问别人吧

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2楼2016-09-29 07:42:45
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rhjilio

新虫 (小有名气)

我还没做到这步,想问问你连接目地基因到PET28a载体时,你是怎么连接成功的?

发自小木虫Android客户端
3楼2016-09-29 09:10:54
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sunnypanda

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-09-30 22:58:43
我的蛋白在BL21里面表达 37度时候包涵体几乎全部是;但是低温16-18度诱导表达 时间可以稍稍长一点 上清里面占60%
建议低温 延长时间至16h
4楼2016-09-29 10:26:51
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aoda123

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by sunnypanda at 2016-09-29 14:26:51
我的蛋白在BL21里面表达 37度时候包涵体几乎全部是;但是低温16-18度诱导表达 时间可以稍稍长一点 上清里面占60%
建议低温 延长时间至16h

用过16度过夜,依然是包涵体表达
身体健康,工作顺利
5楼2016-09-30 19:34:08
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aoda123

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by rhjilio at 2016-09-29 13:10:54
我还没做到这步,想问问你连接目地基因到PET28a载体时,你是怎么连接成功的?

酶切,T4酶在4度过夜连接
身体健康,工作顺利
6楼2016-09-30 19:35:13
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7楼2016-09-30 19:44:02
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匿名

用户注销 (正式写手)

本帖仅楼主可见
8楼2017-08-18 09:33:13
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aoda123

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 欣玲99 at 2017-08-18 13:33:13
你好,我也想用pet-sumo表达蛋白,我在北京,不知可不可以给一点呀

我已经不在北京了,抱歉

发自小木虫Android客户端
身体健康,工作顺利
9楼2017-08-18 13:37:43
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匿名

用户注销 (正式写手)

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10楼2017-08-18 14:12:10
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