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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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冷落清秋雨

新虫 (初入文坛)

[求助] BAC筛选难题 已有1人参与

用PCR的方法筛选BAC文库的时候,已经用引物扩增出384菌板的混池条带,也就是384菌板是有我们所要的基因的,并且测序结果也证明序列就是目的基因;但是,进一步将每行混在一起摇菌再跑PCR的时候就没有条带了,这是哪里出了问题?我做了好几次了,都是这样,是不是不稳定?有谁遇到过吗?急求

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mayunhui

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

如果确定目的基因在板池里面,干嘛不直接用384孔板进行菌落PCR呢,不需要再构建行池或列池了。
书到用时方恨少
3楼2016-10-20 10:02:16
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BAC 文库

新虫 (初入文坛)

384板混合池能够筛选到基因,说明阳性克隆在整个384孔板中。1)构建行列混合池时,是每个混合池都没有阳性条带吗?2)每一行混在一起摇菌?这种做法有问题,会造成部分菌株的丢失。3)是采用菌液PCR吗?
2楼2016-10-14 09:02:17
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