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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » BAC筛选难题
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冷落清秋雨

新虫 (初入文坛)

[求助] BAC筛选难题 已有1人参与

用PCR的方法筛选BAC文库的时候，已经用引物扩增出384菌板的混池条带，也就是384菌板是有我们所要的基因的，并且测序结果也证明序列就是目的基因；但是，进一步将每行混在一起摇菌再跑PCR的时候就没有条带了，这是哪里出了问题？我做了好几次了，都是这样，是不是不稳定？有谁遇到过吗？急求

@天使托 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2016-09-26 10:27:23
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BAC 文库

新虫 (初入文坛)
384板混合池能够筛选到基因，说明阳性克隆在整个384孔板中。1）构建行列混合池时，是每个混合池都没有阳性条带吗？2）每一行混在一起摇菌？这种做法有问题，会造成部分菌株的丢失。3）是采用菌液PCR吗？
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2楼2016-10-14 09:02:17
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mayunhui

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

如果确定目的基因在板池里面，干嘛不直接用384孔板进行菌落PCR呢，不需要再构建行池或列池了。
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书到用时方恨少
3楼2016-10-20 10:02:16
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