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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr扩增的跑出来的点泳条带长度与目的基因不符合？
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huihey

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr扩增的跑出来的点泳条带长度与目的基因不符合？ 已有2人参与

如图片，应该是815左右，现在的才250多，为什么呢？引物用的IRX3R2和F2，做了一个温度梯度的58度到61度。体系如下图，什么原因？

pcr扩增的跑出来的点泳条带长度与目的基因不符合？


pcr扩增的跑出来的点泳条带长度与目的基因不符合？-1


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1楼 2016-09-25 19:27:16
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huihey

新虫 (初入文坛)
引物长度应该没什么问题

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2楼2016-09-25 20:22:19
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
确定PCR程序没有问题的的话，推测可能是模板的原因。
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3楼2016-09-26 11:21:09
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llsllslls92

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR做不出来的很大问题在于引物的设计，引物设计的好，前提是模板要正常，一般都能扩增出条带来，基本与温度没什么大关系，现在，我建议你检查下模板的质量，你是用的cDNA 所以RNA的提取质量一定要过关，还有这个基因是组成型表达的还是诱导表达的，需要先了解下在选择合适的组织进行提取，做PCR时， 可以先做个大的温度跨度进行PCR，50度一个，55度一个 60度一个 ，延伸1分钟，制备质量好点的1%的胶进行电泳，起码把Marker 跑清楚漂亮点。
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4楼2016-09-26 13:50:58
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