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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 细菌DNA提取之后的琼脂糖凝胶电泳图，为什么条带总是不清晰？
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maru酱

新虫 (初入文坛)

[求助] 细菌DNA提取之后的琼脂糖凝胶电泳图，为什么条带总是不清晰？ 已有2人参与

我是刚刚接触基因鉴定试验，从土壤中分离了几株细菌，想做16s rRNA，第一步提取DNA，先跑凝胶电泳确认是否成功，然后再进行PCR，
但是电泳跑完的图带总是不清晰，这是什么原因？向各位前辈求教~~~~~

细菌DNA提取之后的琼脂糖凝胶电泳图，为什么条带总是不清晰？
DSCF5381.JPG
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1楼 2016-09-25 15:55:47
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烟雨莫问

金虫 (小有名气)
总是感觉上样量太少。。。上样量不用太多，marker也一样。缓冲液和制胶都会影响，另外添加染料要注意把握时间

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2楼2016-09-26 00:07:19
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liuhaolin3

至尊木虫 (著名写手)
这个不影响你后续的PCR，不用太担心，直接进行PCR即可

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4楼2016-09-26 08:50:05
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lipieeyao

铜虫 (初入文坛)
感觉上样太少，同样Maker也没跑好
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6楼2016-09-26 13:21:02
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maru酱

新虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by 烟雨莫问 at 2016-09-26 00:07:19
总是感觉上样量太少。。。上样量不用太多，marker也一样。缓冲液和制胶都会影响，另外添加染料要注意把握时间

我是5μl样品加1μl缓冲液，marker是2μl。 由于4号条带上样的时候漏出去了一大部分，所以又重新做了一个5号，4号和5号条带是同一个样品，但是5号这样模糊了也是上样量多了么？
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3楼2016-09-26 08:27:29
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maru酱

新虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by liuhaolin3 at 2016-09-26 08:50:05
这个不影响你后续的PCR，不用太担心，直接进行PCR即可

好的，还有一个另外的问题，我们实验室的dNTP用完了，预约还需要等几天，借的其他实验室的不同厂家生产的dNTP会有影响吗？dNTP是日本产的，polymerase和primer是美国产的~
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5楼2016-09-26 10:02:43
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wangzi4eve

新虫 (小有名气)
dNTP没什么影响，不一定要用配套的

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7楼2016-09-26 17:04:12
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maru酱

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wangzi4eve at 2016-09-26 17:04:12
dNTP没什么影响，不一定要用配套的

谢谢 ，我已经用了
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8楼2016-09-26 18:47:28
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maru酱

新虫 (初入文坛)
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6楼: Originally posted by lipieeyao at 2016-09-26 13:21:02
感觉上样太少，同样Maker也没跑好

上样都是和实验室其他人加的量一样的呀
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9楼2016-09-26 18:48:07
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liuhaolin3

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by maru酱 at 2016-09-26 10:02:43
好的，还有一个另外的问题，我们实验室的dNTP用完了，预约还需要等几天，借的其他实验室的不同厂家生产的dNTP会有影响吗？dNTP是日本产的，polymerase和primer是美国产的~...

7楼说的对，没关系是的

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10楼2016-09-26 20:20:43
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