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maru酱

新虫 (初入文坛)

[求助] 细菌DNA提取之后的琼脂糖凝胶电泳图,为什么条带总是不清晰? 已有2人参与

我是刚刚接触基因鉴定试验,从土壤中分离了几株细菌,想做16s rRNA,第一步提取DNA,先跑凝胶电泳确认是否成功,然后再进行PCR,
但是电泳跑完的图带总是不清晰,这是什么原因?向各位前辈求教~~~~~

细菌DNA提取之后的琼脂糖凝胶电泳图,为什么条带总是不清晰?
DSCF5381.JPG
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烟雨莫问

金虫 (小有名气)

总是感觉上样量太少。。。上样量不用太多,marker也一样。缓冲液和制胶都会影响,另外添加染料要注意把握时间

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2楼2016-09-26 00:07:19
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liuhaolin3

至尊木虫 (著名写手)

这个不影响你后续的PCR,不用太担心,直接进行PCR即可

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4楼2016-09-26 08:50:05
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lipieeyao

铜虫 (初入文坛)

感觉上样太少,同样Maker也没跑好
6楼2016-09-26 13:21:02
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maru酱

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 烟雨莫问 at 2016-09-26 00:07:19
总是感觉上样量太少。。。上样量不用太多,marker也一样。缓冲液和制胶都会影响,另外添加染料要注意把握时间

我是5μl样品加1μl缓冲液,marker是2μl。 由于4号条带上样的时候漏出去了一大部分,所以又重新做了一个5号,4号和5号条带是同一个样品,但是5号这样模糊了也是上样量多了么?
3楼2016-09-26 08:27:29
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maru酱

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by liuhaolin3 at 2016-09-26 08:50:05
这个不影响你后续的PCR,不用太担心,直接进行PCR即可

好的,还有一个另外的问题,我们实验室的dNTP用完了,预约还需要等几天,借的其他实验室的不同厂家生产的dNTP会有影响吗?dNTP是日本产的,polymerase和primer是美国产的~
5楼2016-09-26 10:02:43
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wangzi4eve

新虫 (小有名气)

dNTP没什么影响,不一定要用配套的

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7楼2016-09-26 17:04:12
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maru酱

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by wangzi4eve at 2016-09-26 17:04:12
dNTP没什么影响,不一定要用配套的

谢谢 ,我已经用了
8楼2016-09-26 18:47:28
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maru酱

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by lipieeyao at 2016-09-26 13:21:02
感觉上样太少,同样Maker也没跑好

上样都是和实验室其他人加的量一样的呀
9楼2016-09-26 18:48:07
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liuhaolin3

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by maru酱 at 2016-09-26 10:02:43
好的,还有一个另外的问题,我们实验室的dNTP用完了,预约还需要等几天,借的其他实验室的不同厂家生产的dNTP会有影响吗?dNTP是日本产的,polymerase和primer是美国产的~...

7楼说的对,没关系是的

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10楼2016-09-26 20:20:43
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