24小时热门版块排行榜    

查看: 4481  |  回复: 13

huaizhenkai

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by milamiya at 2016-09-26 10:48:09
采用Superdex G75 理论上确实是可以分开的,但那只是理论。个人观点哈,不到万不得已不要使用分子筛,这个虽然简单,但是如果分子量差异没有那么明显的话分离度不会很好的,对于做工艺开发而言,不考虑收率和成本是 ...

谢谢你的答复,我可以试一下离子交换柱,看看是不是二三聚体,如果真是二三聚体应该是分不开的。
好好学习,天天向上!
11楼2016-09-26 12:51:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by huaizhenkai at 2016-09-26 11:11:52
你好,谢谢你的解答。
1. Buffer中是有1mM DTT的。不好意思,不太明白你说的?你说的Western blotting方法,因为我的目的蛋白含有His-tag就可以区分二三聚体了??聚体区分原理是什么,可以说的详细一些吗?
2.  ...

1. WB看看两个大小的位置是否都有你的tag。如果都有,就很有可能是多聚体。
2. 主要是看是否高于柱子饱和上限了,你如果担心可以降低上样量。非变性胶就是native-page。
3. 拿到二维应该可以很容易分辨出大概的氨基酸个数,特别是想色氨酸这种,出峰位置特别,可以数出来的。如果样品中有大量其他蛋白,很容易就辨认出来了。至于多聚体之类的,估计要区分比较困难。

另外楼下说的离子交换你可以试试,蛋白分离无外乎就是亲和柱,离子交换柱和分子筛三种手段。
12楼2016-09-26 13:27:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liu-chuan

铁虫 (初入文坛)

280不准的,除非是抗体,重组蛋白最好用考马斯亮蓝法

发自小木虫Android客户端
13楼2016-09-26 16:39:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huaizhenkai

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by xuweitao at 2016-09-26 13:27:07
1. WB看看两个大小的位置是否都有你的tag。如果都有,就很有可能是多聚体。
2. 主要是看是否高于柱子饱和上限了,你如果担心可以降低上样量。非变性胶就是native-page。
3. 拿到二维应该可以很容易分辨出大概的氨 ...

好的,谢谢。目前我可以先降低下上样量,再过一下Superdex 75试一下看能不能分开;如果同样还是这三条带的话,再检测是否为多聚体和尝试离子交换柱分离。有问题再请教您!谢谢
好好学习,天天向上!
14楼2016-09-27 15:13:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 huaizhenkai 的主题更新
信息提示
请填处理意见