24小时热门版块排行榜    

查看: 4667  |  回复: 13

huaizhenkai

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by milamiya at 2016-09-26 10:48:09
采用Superdex G75 理论上确实是可以分开的,但那只是理论。个人观点哈,不到万不得已不要使用分子筛,这个虽然简单,但是如果分子量差异没有那么明显的话分离度不会很好的,对于做工艺开发而言,不考虑收率和成本是 ...

谢谢你的答复,我可以试一下离子交换柱,看看是不是二三聚体,如果真是二三聚体应该是分不开的。
好好学习,天天向上!
11楼2016-09-26 12:51:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by huaizhenkai at 2016-09-26 11:11:52
你好,谢谢你的解答。
1. Buffer中是有1mM DTT的。不好意思,不太明白你说的?你说的Western blotting方法,因为我的目的蛋白含有His-tag就可以区分二三聚体了??聚体区分原理是什么,可以说的详细一些吗?
2.  ...

1. WB看看两个大小的位置是否都有你的tag。如果都有,就很有可能是多聚体。
2. 主要是看是否高于柱子饱和上限了,你如果担心可以降低上样量。非变性胶就是native-page。
3. 拿到二维应该可以很容易分辨出大概的氨基酸个数,特别是想色氨酸这种,出峰位置特别,可以数出来的。如果样品中有大量其他蛋白,很容易就辨认出来了。至于多聚体之类的,估计要区分比较困难。

另外楼下说的离子交换你可以试试,蛋白分离无外乎就是亲和柱,离子交换柱和分子筛三种手段。
12楼2016-09-26 13:27:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liu-chuan

铁虫 (初入文坛)

280不准的,除非是抗体,重组蛋白最好用考马斯亮蓝法

发自小木虫Android客户端
13楼2016-09-26 16:39:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huaizhenkai

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by xuweitao at 2016-09-26 13:27:07
1. WB看看两个大小的位置是否都有你的tag。如果都有,就很有可能是多聚体。
2. 主要是看是否高于柱子饱和上限了,你如果担心可以降低上样量。非变性胶就是native-page。
3. 拿到二维应该可以很容易分辨出大概的氨 ...

好的,谢谢。目前我可以先降低下上样量,再过一下Superdex 75试一下看能不能分开;如果同样还是这三条带的话,再检测是否为多聚体和尝试离子交换柱分离。有问题再请教您!谢谢
好好学习,天天向上!
14楼2016-09-27 15:13:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 huaizhenkai 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 305求调剂 +4 哇卢卡库 2026-03-26 4/200 2026-03-26 20:58 by sanrepian
[考研] 321求调剂 +6 wasdssaa 2026-03-26 6/300 2026-03-26 20:57 by sanrepian
[考研] 求调剂 +5 芦lty 2026-03-25 6/300 2026-03-26 20:49 by 不吃魚的貓
[考研] 324求调剂 +4 wysyjs25 2026-03-21 4/200 2026-03-26 20:38 by fmesaito
[考研] 085701环境工程,267求调剂 +4 minht 2026-03-26 4/200 2026-03-26 20:14 by barlinike
[考研] 求调剂 +8 Auroracx 2026-03-22 8/400 2026-03-26 19:55 by 不吃魚的貓
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-26 6/300 2026-03-26 18:03 by 邱gl
[考研] 085601求调剂总分293英一数二 +4 钢铁大炮 2026-03-24 4/200 2026-03-26 16:28 by dick_runner
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +9 holy J 2026-03-21 9/450 2026-03-26 15:47 by 161765490
[考研] 打过很多竞赛,085406控制工程300分,求调剂 +3 askeladz 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:08 by 给你你注意休息
[考研] 299求调剂 +4 15188958825 2026-03-25 4/200 2026-03-25 22:56 by 418490947
[考研] 359求调剂 +3 王了个楠 2026-03-25 3/150 2026-03-25 12:50 by Dyhoer
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 一志愿河北工业大学0817化工278分求调剂 +7 jhybd 2026-03-23 12/600 2026-03-24 09:03 by jhybd
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:25 by pswait
[考研] 336求调剂 +4 收到VS 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:02 by macy2011
[考研] 一志愿华中农业071010,总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 298求调剂一志愿211 +3 上岸6666@ 2026-03-20 3/150 2026-03-22 15:50 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见