24小时热门版块排行榜    

查看: 5075  |  回复: 13

huaizhenkai

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by milamiya at 2016-09-26 10:48:09
采用Superdex G75 理论上确实是可以分开的,但那只是理论。个人观点哈,不到万不得已不要使用分子筛,这个虽然简单,但是如果分子量差异没有那么明显的话分离度不会很好的,对于做工艺开发而言,不考虑收率和成本是 ...

谢谢你的答复,我可以试一下离子交换柱,看看是不是二三聚体,如果真是二三聚体应该是分不开的。
好好学习,天天向上!
11楼2016-09-26 12:51:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by huaizhenkai at 2016-09-26 11:11:52
你好,谢谢你的解答。
1. Buffer中是有1mM DTT的。不好意思,不太明白你说的?你说的Western blotting方法,因为我的目的蛋白含有His-tag就可以区分二三聚体了??聚体区分原理是什么,可以说的详细一些吗?
2.  ...

1. WB看看两个大小的位置是否都有你的tag。如果都有,就很有可能是多聚体。
2. 主要是看是否高于柱子饱和上限了,你如果担心可以降低上样量。非变性胶就是native-page。
3. 拿到二维应该可以很容易分辨出大概的氨基酸个数,特别是想色氨酸这种,出峰位置特别,可以数出来的。如果样品中有大量其他蛋白,很容易就辨认出来了。至于多聚体之类的,估计要区分比较困难。

另外楼下说的离子交换你可以试试,蛋白分离无外乎就是亲和柱,离子交换柱和分子筛三种手段。
12楼2016-09-26 13:27:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liu-chuan

铁虫 (初入文坛)

280不准的,除非是抗体,重组蛋白最好用考马斯亮蓝法

发自小木虫Android客户端
13楼2016-09-26 16:39:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huaizhenkai

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by xuweitao at 2016-09-26 13:27:07
1. WB看看两个大小的位置是否都有你的tag。如果都有,就很有可能是多聚体。
2. 主要是看是否高于柱子饱和上限了,你如果担心可以降低上样量。非变性胶就是native-page。
3. 拿到二维应该可以很容易分辨出大概的氨 ...

好的,谢谢。目前我可以先降低下上样量,再过一下Superdex 75试一下看能不能分开;如果同样还是这三条带的话,再检测是否为多聚体和尝试离子交换柱分离。有问题再请教您!谢谢
好好学习,天天向上!
14楼2016-09-27 15:13:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 huaizhenkai 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 什么时候开奖? +4 CrisMessi 2026-08-18 4/200 2026-08-19 00:53 by gatelove
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 27/1350 2026-08-18 21:44 by Noways
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +3 瞬息宇宙 2026-08-15 3/150 2026-08-18 21:40 by xiaohuixin
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 9/450 2026-08-18 20:09 by 奶牛小黑
[基金申请] 朋友圈看到的 +4 wangzilk 2026-08-18 5/250 2026-08-18 19:25 by wangzilk
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +51 医学老男孩 2026-08-13 110/5500 2026-08-18 19:07 by icerianxia
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +8 基诺咪客 2026-08-17 11/550 2026-08-18 17:13 by 悠然熊猫
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +4 Tide man 2026-08-14 5/250 2026-08-18 11:35 by Tide man
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
信息提示
请填处理意见