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风之翼HWX

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化 已有4人参与

这是同一批复性液CM柱纯化所出现的峰型图，请大家帮我看看，为什么两个峰所示的UV值相差大，而且跑出来的峰型重复性很差？？？谢谢

蛋白纯化
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蛋白纯化-1
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1楼 2016-09-22 17:04:26
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1071557849

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

相差大有时候和你两次的的装柱水平不同有关系，或者柱子性能下降了，或者你的上样量、上样速度，洗脱速度等等有关系吧，中间的两个峰，第一个图没怎么分开
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2楼2016-09-29 16:12:03
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风之翼HWX

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 1071557849 at 2016-09-29 16:12:03
相差大有时候和你两次的的装柱水平不同有关系，或者柱子性能下降了，或者你的上样量、上样速度，洗脱速度等等有关系吧，中间的两个峰，第一个图没怎么分开

谢谢！！！上样量、流速、洗脱等的条件是没有变得，柱效测得也在合格范围之内，不过每次使用前柱子的细管子里会有气泡，每次都必须要进行处理，不知道这样会不会影响柱子
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3楼2016-10-08 16:27:40
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ljgangxmc

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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3楼: Originally posted by 风之翼HWX at 2016-10-08 16:27:40
谢谢！！！上样量、流速、洗脱等的条件是没有变得，柱效测得也在合格范围之内，不过每次使用前柱子的细管子里会有气泡，每次都必须要进行处理，不知道这样会不会影响柱子...

楼主两次层析是连续操作的么？看横坐标像是连续操作的，两次操作有做CIP么？线性梯度和阶段梯度两次完全相同的么？
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4楼2016-10-09 09:47:32
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风之翼HWX

新虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by ljgangxmc at 2016-10-09 09:47:32
楼主两次层析是连续操作的么？看横坐标像是连续操作的，两次操作有做CIP么？线性梯度和阶段梯度两次完全相同的么？...

两次层析是分开做的，但是是同一批复性液，每次做完之后我们都会做CIP，而且两次的所有操作和条件都是一样的，柱效正常，所以我现在还没有找到原因。
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5楼2016-10-10 11:02:57
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风之翼HWX

新虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by ljgangxmc at 2016-10-09 09:47:32
楼主两次层析是连续操作的么？看横坐标像是连续操作的，两次操作有做CIP么？线性梯度和阶段梯度两次完全相同的么？...

我的这种现象是从某一次的实验过后就一直出现峰值低、峰型不规则的现象
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6楼2016-10-10 11:05:04
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ljgangxmc

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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5楼: Originally posted by 风之翼HWX at 2016-10-10 11:02:57
两次层析是分开做的，但是是同一批复性液，每次做完之后我们都会做CIP，而且两次的所有操作和条件都是一样的，柱效正常，所以我现在还没有找到原因。...

待层析的复性液如何保存的？有没有可能保存条件造成复性液中蛋白持续复性或发生其他一些结构性变化
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7楼2016-10-14 13:52:42
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家

【答案】应助回帖

看你两个图，两次蛋白都没有分开。首先装柱及纯化过程不能有气泡。再一个你的线性洗脱或梯度洗脱每个盐浓度下的洗脱时间两次是否一致。试试拉低你的洗脱梯度。祝你顺利。

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8楼2016-10-16 11:33:14
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zhang001zh

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

两个蛋白峰没有分离开，洗脱梯度没有设计好，重新做连续线性洗脱，优化梯度。复性液中蛋白状态可能会随着时间变化，楼主可以多复性一段时间让里面蛋白状态尽量均一。
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9楼2016-10-17 10:29:40
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风之翼HWX

新虫 (初入文坛)
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7楼: Originally posted by ljgangxmc at 2016-10-14 13:52:42
待层析的复性液如何保存的？有没有可能保存条件造成复性液中蛋白持续复性或发生其他一些结构性变化...

待层析的复性液放在4℃的冰箱内保存的，目前双峰问题推测可能是复兴过程产生的，至于峰型的话，上次将柱子重装有明显好转。
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10楼2016-10-17 14:20:55
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