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prthefu木虫 (著名写手)
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蛋白跑PAGE，发现上清、沉淀都有目的带，怎么解 已有6人参与
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某蛋白，原核表达，带His标签。 氨基酸理论预测分子量约32kDa，加上his标签的大小，应该对条带位置影响不大吧。 1、跑PAGE后，图1，发现重组菌的上清、沉淀在对应大小出都出现了目的条带（35下面），现在也不确定到底是哪个条带，是沉淀处较浅的那个单一带还是上清中稍微有些上翻的带。 2、分析蛋白疏水性的时候，图2，得出的值是MIN: -3.289, MAX: 2.656 ，这应该说明该蛋白偏亲水性大于疏水性，而且，由图知，两边亲水，中间疏水，但是整体来说，蛋白是亲水还是疏水呢？确定了它是亲水还是疏水，是不是就知道上清or沉淀的带是目的条带。 3、关于纯化，如果过镍柱，洗脱得到的管中有很多盐，并不是纯化的蛋白，过柱后还这么做呢。  图2.png  图1.png |
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bright8
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9楼2016-09-23 23:26:31
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