| 查看: 5354 | 回复: 17 | ||
熊猫爱吃竹子新虫 (小有名气)
|
[求助]
大提质粒时如何提高质粒浓度？ 已有7人参与
|
|
|
用thermo的试剂盒从150ml菌液中提质粒，最后用nano测只有200多ng/ml，别人一般都能提到900ng/ml左右，请问一下有什么需要注意的地方吗，在操作过程中？谢谢 发自小木虫IOS客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有198人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 【资料】分子生物学常见问题解答
已经有30人回复
13楼2016-09-22 22:16:47
【答案】应助回帖
|
质粒提取，不但困扰了好些新手，而且不少老手提取质粒也不稳定。 影响质粒产量的因素很多，现列举部分，望同道中人完善。 1、质粒本身：高拷贝还是低拷贝，影响特别大。低拷贝的特定质粒可以考虑加氯霉素提高拷贝数（建议先了解氯霉素提高质粒拷贝数的原理，应该不是所有的都有效，可能起到相反效果）。 2. 宿主菌：常用的DH5α等，有利于得到高产量的质粒。另外一些菌种效果可能差很多（同一实验室用相同菌种，若别人得率高，应该可以排除这个原因）。 3. 摇菌时间：这个影响非常大！有一些实验者在这方面做得很不好。建议摇菌12-16小时，时间过短，单个菌体中的质粒拷贝数会低很多！时间过长，当心细菌可能死亡，导致基因组污染等问题。特殊菌种、特殊摇菌温度，时间需另行把握。 4. 摇菌用容器大小：这个影响也是比较大的。摇150ml的菌液，应该用500ml以上的摇菌瓶，效果比250ml或以下的要好。基本原则是摇菌容器的体积是菌液体积的4倍或以上。 5. 菌种来源：新转化的菌种比冻存菌液要好。 6. 培养基：应该用高品质新配置的培养基。 7. 菌液用量：恰当最好，宁少勿多。必须确保充分裂解，否则产量和纯度会显著降低。 8. 质粒提取试剂盒的因素：现在市场上质粒提取试剂盒很多，鱼龙混杂。好些号称高产、高纯度无内毒素大提，实际产量和纯度堪忧。OD260判断浓度、OD260/OD280和OD260/OD230比值判断纯度，很多时候并不客观。好些情况下，杂质含量高，OD260、280、230差不多按比例升高，比值好并不代表纯度就一定好、建议进一步琼脂糖胶电泳。（同一实验同一试剂盒，可排除这方面因素）。 9. 其它因素：待大家补充。 |
14楼2016-09-27 17:46:58
2楼2016-09-18 01:08:51
liling0601
铜虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 307.2
- 散金: 34
- 帖子: 148
- 在线: 62.8小时
- 虫号: 2661775
- 注册: 2013-09-17
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2016-09-18 11:27:11
010308Jing
木虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 3149.2
- 散金: 73
- 红花: 6
- 帖子: 552
- 在线: 125.1小时
- 虫号: 2146845
- 注册: 2012-11-25
- 性别: MM
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
4楼2016-09-18 11:55:55
花花贝
金虫 (知名作家)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 4729.4
- 散金: 1270
- 红花: 22
- 帖子: 5903
- 在线: 905.3小时
- 虫号: 931160
- 注册: 2009-12-20
- 专业: 同步辐射技术及其应用
5楼2016-09-19 22:03:23
rhjilio
新虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2761.7
- 散金: 40
- 红花: 2
- 帖子: 259
- 在线: 95.8小时
- 虫号: 4807421
- 注册: 2016-06-30
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
6楼2016-09-20 07:19:41
7楼2016-09-20 07:28:39
8楼2016-09-20 12:39:57
9楼2016-09-20 13:01:05
花花贝
金虫 (知名作家)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 4729.4
- 散金: 1270
- 红花: 22
- 帖子: 5903
- 在线: 905.3小时
- 虫号: 931160
- 注册: 2009-12-20
- 专业: 同步辐射技术及其应用
10楼2016-09-20 13:22:09
20