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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于SDS-PAGＥ电泳
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芯尹

[交流] 关于SDS-PAGＥ电泳

　　最近一直在做SDS-PAGE电泳，蛋白为低密度脂蛋白，将近跑了5次，没有一次有带，很苦恼。 本科不是学生物的，所以有很多不懂，溶液配制拿的是以前生物学院的方案，考马斯亮蓝染色。 后来怀疑是不是脂蛋白不能这样跑电泳，于是用师兄已经跑出条带的蛋白质，但仍没有效果。
     一直不知道错在哪里，帮帮忙吧，谢谢！！
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1楼 2008-11-21 10:19:14
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
不知LZ是哪里的？

我是武汉的，大概是天气的原因，我们这边很多实验室都跑不好SDS-PAGE胶
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2楼2008-11-21 10:31:58
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nn0808

银虫 (小有名气)
★ ★
芯尹(金币+2,VIP+0):谢谢
你可以从这几方面考虑:电泳槽有问题(这很有可能,因为你师兄的蛋白之前可以跑,现在却不行了);上样量是否足够;是否已经跑过隆;又或者蛋白质没处理好,不带电.在下的愚见希望能帮你解决这个问题!
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3楼2008-11-21 11:33:12
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prettymuch

★
芯尹(金币+1,VIP+0):谢谢
可以考虑一下以下问题：重配裂解液、DDT\APS需新鲜配置，蛋白上样之前煮沸、如果这些都没问题的话可能是电泳槽的问题了~
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4楼2008-11-21 14:53:47
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芯尹

谢谢各位，本人在西安。不知道你们所说的电用槽的问题是指哪方面？
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5楼2008-11-21 15:21:21
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herot

金虫 (小有名气)
★
芯尹(金币+1,VIP+0):谢谢
你自己的实验过程介绍太少，很难说什么原因。
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树欲静而风不止
6楼2008-11-21 15:48:32
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platto

木虫 (著名写手)

一窍不通
★
芯尹(金币+1,VIP+0):谢谢
SDS-PAGE应该是比较简单的实验啊。
在做胶的时候，冬天天冷，胶凝固的慢，当心漏胶；夏天天热，胶凝固的快，因此，为了保证胶的均一性，应该尽可能快的操作。
电压不要接反了，尤其是使用国产的稳压器。
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七窍通了六窍
7楼2008-11-21 17:28:43
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nn0808

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by nn0808 at 2008-11-21 11:33:
你可以从这几方面考虑:电泳槽有问题(这很有可能,因为你师兄的蛋白之前可以跑,现在却不行了);上样量是否足够;是否已经跑过隆;又或者蛋白质没处理好,不带电.在下的愚见希望能帮你解决这个问题!

电泳槽常见的问题:电源接触不良,线路有问题;短路;漏液(严重的会使电泳槽无法通电).可以这样判断电泳槽是否有问题:观察电泳时是否有气泡产生,如果有说明有电流,电泳槽没问题;观察电泳时溴酚兰指示剂是否向下移动了;直接观察稳压器上面电流数值大小,如果太小,说明电阻很大,电泳很难进行.
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8楼2008-11-22 18:08:40
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wxiao1985

铜虫 (初入文坛)
实验过程说的不详细，不知怎样具体帮你，首先胶能凝固，就不要太悲观
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在学术海洋里遨游
9楼2008-11-24 13:49:31
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