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girlsearch

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于TSK SW2000凝胶色谱柱使用的问题，有的分子量大的蛋白为什么后出峰呢

我用凝胶色谱柱想检测出蛋白水解后都有哪些分子量的多肽。色谱柱是TSK SW2000（7.5*600 mm），单一流动相：30%乙腈+0.1%三氟乙酸；发现18.3kDa的蛋白比17kDa的蛋白出峰晚，工程师说应该是受疏水性的影响，可是当流动相中的乙腈5%时，也是一样的情况。有哪位大神知道这是什么原因吗？请指教
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1楼 2016-09-13 16:13:54
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xiaoLifeiD

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
girlsearch: 金币+10, 博学EPI+1, ★★★很有帮助 2016-09-19 14:28:52
两种蛋白的分子密度一样么？如果不一样的话可能不能按照出峰时间来考虑

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2楼2016-09-14 07:20:45
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girlsearch

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaoLifeiD at 2016-09-14 07:20:45
两种蛋白的分子密度一样么？如果不一样的话可能不能按照出峰时间来考虑

请问分子密度如何知道呢？我需要分子密度一样的蛋白来作对照绘制标曲
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3楼2016-09-19 14:32:31
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xiaoLifeiD

至尊木虫 (知名作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by girlsearch at 2016-09-19 14:32:31
请问分子密度如何知道呢？我需要分子密度一样的蛋白来作对照绘制标曲...

简单解释的话，一张纸体积大，团成一团体积小，如果你用画校正曲线的方法，机器会认为没团起来的纸分子量大于纸团，这显然是错的。我建议你要么用测绝对分子量的GPC，要么去跑电泳

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4楼2016-09-19 14:48:20
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girlsearch

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xiaoLifeiD at 2016-09-19 14:48:20
简单解释的话，一张纸体积大，团成一团体积小，如果你用画校正曲线的方法，机器会认为没团起来的纸分子量大于纸团，这显然是错的。我建议你要么用测绝对分子量的GPC，要么去跑电泳
...

然而工程师说只有测相对分子量的柱子，，，。我的样品是混合多肽，分子量较小，无法用电泳准确分析。。
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5楼2016-09-19 17:00:32
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新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xiaoLifeiD at 2016-09-19 14:48:20
简单解释的话，一张纸体积大，团成一团体积小，如果你用画校正曲线的方法，机器会认为没团起来的纸分子量大于纸团，这显然是错的。我建议你要么用测绝对分子量的GPC，要么去跑电泳
...

你好，如果我的样品中有盐，我在过柱子之前是不是要先把盐除掉呢
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6楼2016-09-20 09:20:37
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xiaoLifeiD

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by girlsearch at 2016-09-20 09:20:37
你好，如果我的样品中有盐，我在过柱子之前是不是要先把盐除掉呢...

是的，样品的预处理会直接影响结果的准确度，色谱柱的盐浓度有上限

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7楼2016-09-20 09:58:49
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