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有关PCR的几个问题
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最近做了一个月的PCR，第一次是师姐加样，做出了漂亮的条带，第二次自己做，同样的试剂，同样的条件，可能加样没加好，没有做出来。第三次再做做出来了，但第四次第五次就又没有条带了，换了模板，测了比值为1.76，浓度为0.162，25的体系加了0.5微升。还是没有条带，想请教大家，像我这样做出过两次还需不需要摸别的条件？还需注意些什么？排除什么别的问题？另外，我的试剂没有分装，每次做都从冰箱拿出来解冻，做完了再放-20度的冰箱，是不是会影响试剂？我也没有在冰上配体系，是否也有关系？一般模板浓度加多少？我的是人血DNA。 谢谢！ |
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