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有关PCR的几个问题
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最近做了一个月的PCR,第一次是师姐加样,做出了漂亮的条带,第二次自己做,同样的试剂,同样的条件,可能加样没加好,没有做出来。第三次再做做出来了,但第四次第五次就又没有条带了,换了模板,测了比值为1.76,浓度为0.162,25的体系加了0.5微升。还是没有条带,想请教大家,像我这样做出过两次还需不需要摸别的条件?还需注意些什么?排除什么别的问题?另外,我的试剂没有分装,每次做都从冰箱拿出来解冻,做完了再放-20度的冰箱,是不是会影响试剂?我也没有在冰上配体系,是否也有关系?一般模板浓度加多少?我的是人血DNA。 谢谢! |
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