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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 小白一枚，求免疫共沉淀protocol
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liuyan7101

金虫 (正式写手)

[求助] 小白一枚，求免疫共沉淀protocol

本人小白，求免疫沉淀的详细protocol，我知道网上资源很多，可是我按照网上的方法做下来，该沉淀的样品中没有条带，反倒是阴性对照中的样品还有条带，感觉像是没有洗干净的样子，跪求大神，已经被折磨了几个月了，最好是有个视频啥的，答案好的另送100金币!@wizardfan@飞约疯人院
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1楼 2016-09-09 15:49:16
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liuyan7101

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by hchen82 at 2016-09-14 00:52:03
WB 能检测到你的蛋白么？抗体用的是自身蛋白还是tag之类的！control里的带是对应的目的蛋白么？
Ps：提高氯化钠 和去污剂 多洗几次不用vortex!
...

我的全细胞裂解对照中都可以检测到，prey和bait都没问题，抗体用的都是tag，control里的带是prey，但是这个样品中没有bait，理论上prey是不应该被拉下来的。我的buffer中NaCl的浓度时200mM，那如果不用Vortex的话，该如何操作呢？谢谢你！
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9楼2016-09-14 11:54:12
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土豆君

银虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-09-10 22:33:52
阴性本就应该有点条带，IP没条带，说明实验有问题，没拉到产物
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liuyan7101
爱基百客，提供专业级ChIP-seq、ATAC-seq、MeRIP-seq、RIP-seq等表观技术服务
2楼2016-09-10 21:25:39
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liuyan7101

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 土豆君 at 2016-09-10 21:25:39
阴性本就应该有点条带，IP没条带，说明实验有问题，没拉到产物

是这样的，我没表达清楚，我的阴性对照是没有加bait的，只加了prey，但是用抗bait的抗体沉淀完以后，WB检测出了prey，而我的实验组是加了bait和prey的，沉淀完WB检测却没了prey，跪求指导~
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3楼2016-09-11 11:59:50
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hchen82

禁虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-09-11 21:07:34
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

liuyan7101
4楼2016-09-11 13:14:47
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