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tolomua

新虫 (初入文坛)

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[交流] 做得想死，WB验证的结果RT-PCR却重复不出来已有1人参与

是这样的，实验组处理抬高了基因A的表达，名为cell-A，对照组是cell-nc
做完这个处理后，经WB验证有效，细胞形态和活力也有很大差异
之后我要做RT-PCR，设想的是，实验组抬高的基因A会影响基因BCDE……的表达
但是RT-PCR的结果发现没什么差异，就连基因A也没有差异
我曾经想过是不是基因碱基发生同义突变导致引物没有将它们P出来，但那么多个基因同时突变的可能性太小了

提取RNA和RT的过程都很顺利，所有引物同组在别的细胞上做过没问题，那么，还有可能是什么问题呢？

我已经做了三次了，每次都是从处理开始做，每次都是这个狗样子，实在是太灰心了，希望能够得到大家的帮助

我的金币数少于5悬赏不了，所以只能发在交流版，抱歉

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1楼 2016-09-08 20:19:20

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kuaile5420

专家顾问 (著名写手)

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专业: 基因表达调控与表观遗传学
管辖: 生物医药区

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

你是通过什么途径提高了A基因的表达？过表达还是说药物处理？推测你是药物处理，通过加入某种东西刺激了A基因的表达。你说WB很显著？到底是多显著？能否看下图片？还有就是A基因的表达水平是怎样的？能否告诉你做RT-qPCR起始的RNA量以及最终该基因的Ct值？最关键的一点就是你的WB结果有做生物学重复吗？还是就做了一次很显著呢？如果你做了几次都是这样的话，即使RT-qPCR没有显著差异也是可以理解的，因为蛋白量的上调有两种途径，一是mRNA上调（可以通过RT-qPCR和WB检测），二是降解减少（仅仅可以通过WB检测），如果你的是第二种情况的话，那么建议从蛋白质降解途径入手重新思考这个问题。

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坚持到底就是胜利！

2楼2016-09-09 08:48:58