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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教原代细胞培养中PERCOLL使用方法
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shelley_1982

金虫 (小有名气)

[交流] 请教原代细胞培养中PERCOLL使用方法

我现在在摸索大鼠肝细胞的原代培养方法，使用灌注法后，发现细胞的存活率低，是否是我灌注时间过久或是胶原酶用量过度？而且我将细胞用100目滤网过滤后，用percoll液分离去除里面的死细胞和其他杂质细胞等，但分离效果不好，请教高手可否告知我应该使用多少密度的percoll，离心时间及转速，如何配制？非常感谢！
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1楼 2008-11-20 10:17:02
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xuemei1984

禁虫 (小有名气)
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2楼2008-11-20 22:04:32
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shelley_1982

金虫 (小有名气)
谢谢！我再试试！那请问你是用灌注法获得细胞的吗？我的细胞存活率低可能有什么原因呢？
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3楼2008-11-21 08:23:49
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xuemei1984

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
4楼2008-11-21 11:46:31
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shelley_1982

金虫 (小有名气)
是胶原酶4吗？我原来用的0.05%，你一次灌流用多少液体，多少时间啊？我就怕缩短时间消化不充分，并且我一开始就用生理盐水灌，希望能尽量把血细胞冲干净，你呢？
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5楼2008-11-21 13:50:31
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xuemei1984

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
6楼2008-11-23 14:38:26
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shelley_1982

金虫 (小有名气)
我使用percoll离心后的效果还是不好啊!是不是9份Percoll与1份8.5％NaCl混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液(0.85％ NaCl或0.15M PBS)稀释到70%。就相当于把9mlPercoll和1ml8.5％ NaCl混合后，取7ml和3ml0.85％ NaCl混合得70%percoll啊？然后1000-2000rpm离心后，你的分层情况如何啊？谢谢指教！
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7楼2008-12-08 09:36:17
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