24小时热门版块排行榜    

查看: 783  |  回复: 6
当前主题已经存档。

shelley_1982

金虫 (小有名气)

[交流] 请教原代细胞培养中PERCOLL使用方法

我现在在摸索大鼠肝细胞的原代培养方法,使用灌注法后,发现细胞的存活率低,是否是我灌注时间过久或是胶原酶用量过度?而且我将细胞用100目滤网过滤后,用percoll液分离去除里面的死细胞和其他杂质细胞等,但分离效果不好,请教高手可否告知我应该使用多少密度的percoll,离心时间及转速,如何配制?非常感谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuemei1984

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

2楼2008-11-20 22:04:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shelley_1982

金虫 (小有名气)

谢谢!我再试试!那请问你是用灌注法获得细胞的吗?我的细胞存活率低可能有什么原因呢?
3楼2008-11-21 08:23:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuemei1984

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

4楼2008-11-21 11:46:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shelley_1982

金虫 (小有名气)

是胶原酶4吗?我原来用的0.05%,你一次灌流用多少液体,多少时间啊?我就怕缩短时间消化不充分,并且我一开始就用生理盐水灌,希望能尽量把血细胞冲干净,你呢?
5楼2008-11-21 13:50:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuemei1984

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

6楼2008-11-23 14:38:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shelley_1982

金虫 (小有名气)

我使用percoll离心后的效果还是不好啊!是不是9份Percoll与1份8.5%NaCl混合达到生理性渗透压,然后用生理溶液(0.85% NaCl或0.15M PBS)稀释到70%。就相当于把9mlPercoll和1ml8.5% NaCl混合后,取7ml和3ml0.85% NaCl混合得70%percoll啊?然后1000-2000rpm离心后,你的分层情况如何啊?谢谢指教!
7楼2008-12-08 09:36:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 shelley_1982 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见