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转化实验一直不成功 找不到原因 已有7人参与
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本人目前在构建新的表达载体 用的载体是pET-17b 载体与目的基因双酶切之后连接 转化DH5α感受态细胞 长出单菌落后进行验证 然后再从这个DH5α中提取质粒 准备转化到表达菌BL21中 然后就在这一步转化出了问题 怎么都转不进去 转化后涂布的平板就是没有菌落生长 很是苦恼 已经做了好久了 老板见一直没有结果还不满意…… 求大神支招 感激不尽！！ |
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juzhixianwei
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43楼2016-09-13 21:28:54
tayifeita
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2楼2016-09-07 09:29:42
tayifeita
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香，谢谢你的理解与支持。myprayer祝您科研顺利，文章多多。 2016-09-07 18:48:21
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香，谢谢你的理解与支持。myprayer祝您科研顺利，文章多多。 2016-09-07 18:48:21
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从感受态细胞里面提取的质粒确定没问题了话，转化到表达菌的步骤这个体系每个实验室都比较成熟，一般不会出现大的问题，你可以考虑下把涂板子的菌浓度加高一点，这些如果没问题但还是不长菌的话，考虑下重组质粒设计方案的问题了。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-09-07 09:35:57
更恋秋风
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【答案】应助回帖
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香，谢谢你的理解与支持。祝您科研顺利，文章多多。 2016-09-07 18:48:31
xn8008: 应助指数+1 2016-09-08 22:02:53
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xn8008: 应助指数+1 2016-09-08 22:02:53
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第一，你需要知道你们实验室的bl21的效率有多高，第二，如果偏低，可以自己尝试着借一些别人的感受态自己再制备一批（买的不一定很好用），第三，bl21效率本来就不高，不需要转比5a更多的质粒才能有更多阳性克隆 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-09-07 09:38:02