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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于二次PCR
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hyj130kk

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于二次PCR 已有4人参与

我的一次PCR条带很亮且单一，稀释100倍后做二次PCR，二次PCR的条带很暗，还有多条小的杂带，这是为什么？

@biostar2009 @wizardfan @youlinglyw 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2016-09-05 22:36:32
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一次PCR条带亮且单一，为什么还要做二次PCR？如果一次PCR条带亮，稀释100倍仍然高，可能稀释上万倍才行。
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2楼2016-09-06 12:21:11
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kuaile5420

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你好，你这里做的二次PCR，是巢式PCR还是什么啊？为什么要进行后续的PCR？
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坚持到底就是胜利！
3楼2016-09-08 10:46:29
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hyj130kk

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-09-06 12:21:11
一次PCR条带亮且单一，为什么还要做二次PCR？如果一次PCR条带亮，稀释100倍仍然高，可能稀释上万倍才行。

我做了个浓度梯度，从25倍到1000倍，结果都很暗。

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4楼2016-09-09 23:58:08
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hyj130kk

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by kuaile5420 at 2016-09-08 10:46:29
你好，你这里做的二次PCR，是巢式PCR还是什么啊？为什么要进行后续的PCR？

因为连接转换一直不成功，模版又已经用完了，就在二次PCR这里想办法。

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5楼2016-09-10 00:00:02
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rovely1226

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以提高退火温度试试，或者用两步PCR的方法。这种模板非常单一的情况下很容易出现smear或者非特异扩增的。
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6楼2016-09-10 00:50:21
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yuy111

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

PCR product for template. Template should be recovered from gel to get a purification. Please contact roysally@outlook.com for further assistant.
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7楼2016-09-10 01:12:08
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