应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于二次PCR
71/1返回列表
查看: 2280  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

hyj130kk

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于二次PCR 已有4人参与

我的一次PCR条带很亮且单一，稀释100倍后做二次PCR，二次PCR的条带很暗，还有多条小的杂带，这是为什么？

@biostar2009 @wizardfan @youlinglyw 发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-09-05 22:36:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一次PCR条带亮且单一，为什么还要做二次PCR？如果一次PCR条带亮，稀释100倍仍然高，可能稀释上万倍才行。
赞一下 回复此楼
2楼2016-09-06 12:21:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kuaile5420

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你好，你这里做的二次PCR，是巢式PCR还是什么啊？为什么要进行后续的PCR？
赞一下 回复此楼
坚持到底就是胜利！
3楼2016-09-08 10:46:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyj130kk

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-09-06 12:21:11
一次PCR条带亮且单一，为什么还要做二次PCR？如果一次PCR条带亮，稀释100倍仍然高，可能稀释上万倍才行。

我做了个浓度梯度，从25倍到1000倍，结果都很暗。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2016-09-09 23:58:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyj130kk

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by kuaile5420 at 2016-09-08 10:46:29
你好，你这里做的二次PCR，是巢式PCR还是什么啊？为什么要进行后续的PCR？

因为连接转换一直不成功，模版又已经用完了，就在二次PCR这里想办法。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
5楼2016-09-10 00:00:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rovely1226

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以提高退火温度试试，或者用两步PCR的方法。这种模板非常单一的情况下很容易出现smear或者非特异扩增的。
赞一下 回复此楼
6楼2016-09-10 00:50:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuy111

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

PCR product for template. Template should be recovered from gel to get a purification. Please contact roysally@outlook.com for further assistant.
赞一下 回复此楼
7楼2016-09-10 01:12:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hyj130kk 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:01 by mibUvS8DDCwf
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-15 05:00 by mibUvS8DDCwf
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:25 by mibUvS8DDCwf
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-14 23:57 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-14 23:45 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-14 23:24 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 23:13 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:25 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 3/150 2026-09-14 22:24 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:13 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:12 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:01 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:00 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-14 21:37 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:25 by vZfe6xYu34yj
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +4 两三岁ss 2026-09-14 4/200 2026-09-14 20:29 by 班主任的同桌
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-14 18:01 by Aj1rhIDL5ixY
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:13 by Aj1rhIDL5ixY
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-14 15:37 by Aj1rhIDL5ixY
[找工作] 浙江师范大学是怎么坑我的 +6 recruit123 2026-09-09 6/300 2026-09-14 12:00 by 萨仁其其格
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭