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hyj130kk

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于二次PCR 已有4人参与

我的一次PCR条带很亮且单一,稀释100倍后做二次PCR,二次PCR的条带很暗,还有多条小的杂带,这是为什么?

@biostar2009 @wizardfan @youlinglyw 发自小木虫IOS客户端
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一次PCR条带亮且单一,为什么还要做二次PCR?如果一次PCR条带亮,稀释100倍仍然高,可能稀释上万倍才行。
2楼2016-09-06 12:21:11
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kuaile5420

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你好,你这里做的二次PCR,是巢式PCR还是什么啊?为什么要进行后续的PCR?
坚持到底就是胜利!
3楼2016-09-08 10:46:29
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hyj130kk

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-09-06 12:21:11
一次PCR条带亮且单一,为什么还要做二次PCR?如果一次PCR条带亮,稀释100倍仍然高,可能稀释上万倍才行。

我做了个浓度梯度,从25倍到1000倍,结果都很暗。

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4楼2016-09-09 23:58:08
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hyj130kk

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by kuaile5420 at 2016-09-08 10:46:29
你好,你这里做的二次PCR,是巢式PCR还是什么啊?为什么要进行后续的PCR?

因为连接转换一直不成功,模版又已经用完了,就在二次PCR这里想办法。

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5楼2016-09-10 00:00:02
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rovely1226

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以提高退火温度试试,或者用两步PCR的方法。这种模板非常单一的情况下很容易出现smear或者非特异扩增的。
6楼2016-09-10 00:50:21
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yuy111

银虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

PCR product for template. Template should be recovered from gel to get a purification. Please contact roysally@outlook.com for further assistant.
7楼2016-09-10 01:12:08
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