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雪之汐若

银虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by cry_2013 at 2016-09-06 13:38:23
用酶切位点连吧,虽然是老办法,但还是比较有效果的

实在不行就这样了

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因为有了我而让这个世界有一点点的不一样
11楼2016-09-06 17:58:22
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010308Jing

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 雪之汐若 at 2016-09-05 21:32:42
都试过,感觉很难融合在一起
...

其实正常情况6K是应该出得来的,引物设计长一点,换一种比较强大的酶试试

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12楼2016-09-06 18:43:23
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梦想天行

木虫 (职业作家)

Q5酶,phusion酶试试效果不错,我扩增出来8-10k的

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13楼2016-09-06 20:44:24
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梦想天行

木虫 (职业作家)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 雪之汐若 at 2016-09-05 21:32:42
都试过,感觉很难融合在一起
...

Q5酶,phusion酶试试效果不错,我扩增出来8-10k的,好用!

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14楼2016-09-06 20:45:20
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梦想天行

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
10楼: Originally posted by 雪之汐若 at 2016-09-06 17:58:11
有什么好的kit吗?
...

Q5酶,phusion酶试试效果不错,我扩增出来8-10k的,很好用,推荐一下!

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15楼2016-09-06 21:04:05
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by 雪之汐若 at 2016-09-06 17:58:11
有什么好的kit吗?
...

我用过的生工生物工程(上海)股份公司的 Long and Accurate PCR Kit,以人的基因组DNA为模板,扩增过长度为15 kb的片段,扩增效果还是不错的。你可以试试。
rainwater
16楼2016-09-07 14:15:10
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

takara的clontech有个in-fusion的酶,可以用于多片段连接,效果还行。你可以分段扩增,一起连接。

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17楼2016-09-07 23:16:23
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)

Taq可以扩4K,pfu可以扩2k,混在一起可以扩10k

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核酸提取与Taqman诊断
18楼2016-09-08 06:33:10
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)

核酸提取与Taqman诊断
19楼2016-09-08 06:33:37
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)

pfu也可以用KOD等其他聚合酶II代替

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核酸提取与Taqman诊断
20楼2016-09-08 06:33:57
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