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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 长片段PCR问题
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雪之汐若

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by cry_2013 at 2016-09-06 13:38:23
用酶切位点连吧，虽然是老办法，但还是比较有效果的

实在不行就这样了

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因为有了我而让这个世界有一点点的不一样
11楼2016-09-06 17:58:22
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010308Jing

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 雪之汐若 at 2016-09-05 21:32:42
都试过，感觉很难融合在一起
...

其实正常情况6K是应该出得来的，引物设计长一点，换一种比较强大的酶试试

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12楼2016-09-06 18:43:23
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梦想天行

木虫 (职业作家)
Q5酶，phusion酶试试效果不错，我扩增出来8-10k的

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13楼2016-09-06 20:44:24
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梦想天行

木虫 (职业作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 雪之汐若 at 2016-09-05 21:32:42
都试过，感觉很难融合在一起
...

Q5酶，phusion酶试试效果不错，我扩增出来8-10k的，好用！

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14楼2016-09-06 20:45:20
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梦想天行

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
10楼: Originally posted by 雪之汐若 at 2016-09-06 17:58:11
有什么好的kit吗？
...

Q5酶，phusion酶试试效果不错，我扩增出来8-10k的，很好用，推荐一下！

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15楼2016-09-06 21:04:05
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by 雪之汐若 at 2016-09-06 17:58:11
有什么好的kit吗？
...

我用过的生工生物工程（上海）股份公司的 Long and Accurate PCR Kit，以人的基因组DNA为模板，扩增过长度为15 kb的片段，扩增效果还是不错的。你可以试试。
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rainwater
16楼2016-09-07 14:15:10
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)
takara的clontech有个in-fusion的酶，可以用于多片段连接，效果还行。你可以分段扩增，一起连接。

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17楼2016-09-07 23:16:23
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)
Taq可以扩4K，pfu可以扩2k，混在一起可以扩10k

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核酸提取与Taqman诊断
18楼2016-09-08 06:33:10
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)
pfu 0.02U即可

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核酸提取与Taqman诊断
19楼2016-09-08 06:33:37
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)
pfu也可以用KOD等其他聚合酶II代替

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核酸提取与Taqman诊断
20楼2016-09-08 06:33:57
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