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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 考马斯亮蓝法测辣根过氧化物酶的载酶量
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ohc1414

木虫 (正式写手)

[交流] 考马斯亮蓝法测辣根过氧化物酶的载酶量

做固定化酶，选择的酶是HRP，要算载酶量，初步利用的方法定为考马斯亮蓝，可是做标曲时有些疑惑，为什么文献上是用牛血清白蛋白，而不是直接用Hrp做标曲，这样做的目的是什么？能直接用HRP做标曲吗？谢谢

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1楼 2016-09-02 11:09:45
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ohc1414

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-09-02 23:39:32
有HRP标准品，你可以用这个标准品做标准曲线。没有这个标准品，才用BSA做标准品的。如果实验要求不严格，你可以自己用BSA标准品来标定HRP，作为后续实验的标准品。

还有一个小问题，他们溶解酶时，有用0.1mol/l nacl溶液的，也有用0.1mol/l 磷酸缓冲液的，请问都可以还是有哪个好些，再次谢谢！

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4楼2016-09-03 08:18:58
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ohc1414

木虫 (正式写手)
自己顶一下，求前辈解答下

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2楼2016-09-02 14:35:31
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kaobo2012

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
ohc1414: 金币+10, 谢谢 2016-09-03 08:13:37
有HRP标准品，你可以用这个标准品做标准曲线。没有这个标准品，才用BSA做标准品的。如果实验要求不严格，你可以自己用BSA标准品来标定HRP，作为后续实验的标准品。
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3楼2016-09-02 23:39:32
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kaobo2012

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
就我的经验，两都都可以的。但还要看你的实验目的。氯化钠溶液不具有缓冲能力，可能会导致你的酶失活。磷酸盐具有一定的缓冲能力，可以保护酶的活力。但也不一定，有的酶在磷酸盐缓冲液中就没有活性，在Tris-HCl中才有活性。这个我也遇到过。所以，还是要看你实验的目的。
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5楼2016-09-03 19:44:56
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