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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 求助SDS-PAGE电泳条带跑不开是为什么?
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clx要棒棒的

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助SDS-PAGE电泳条带跑不开是为什么? 已有5人参与

原料跑的是大米蛋白，用的12%的分离胶，5%浓缩胶。试剂、缓冲液都是新配置的，tris-HCl的pH值也检查过，没有问题。电压用的是恒流30mA，160V。做了几遍条带都跑不开，连mark的条带都没跑很开，不知道什么原因，个人怀疑是胶的问题，但之前也是按照这个配方，没有出现过这种问题。请教各位有经验的大神！
图片最右边是mark

求助SDS-PAGE电泳条带跑不开是为什么?
无标题.png
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尽最大的努力，不让自己后悔。
1楼 2016-08-31 15:16:40
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

w911227

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
分离胶的浓度太大了吧？换10%或8%的试试。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

clx要棒棒的
苦难的日子终将逝去，但强者却永存
2楼2016-09-01 15:30:30
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帅-Lee

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
胶的浓度应该看你的蛋白大小来定，配胶溶液的PH值也会影响结果的，还有就是你缓冲液是反复用的吗？反复用也跑不开
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

clx要棒棒的
3楼2016-09-01 16:02:50
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普通回帖

clx要棒棒的

新虫 (初入文坛)
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引用回帖:
2楼: Originally posted by w911227 at 2016-09-01 15:30:30
分离胶的浓度太大了吧？换10%或8%的试试。

可是连mark也跑不开，mark说明书上建议分离胶的浓度是12%

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尽最大的努力，不让自己后悔。
4楼2016-09-01 16:11:05
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clx要棒棒的

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 帅-Lee at 2016-09-01 16:02:50
胶的浓度应该看你的蛋白大小来定，配胶溶液的PH值也会影响结果的，还有就是你缓冲液是反复用的吗？反复用也跑不开

缓冲液都是新配的，大米谷蛋白分子量相对交大在60-700kDa之间，但是其他几种蛋白分子量都比较小，都只有几十kDa。我试试再用10%浓度跑跑看效果怎么样吧

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尽最大的努力，不让自己后悔。
5楼2016-09-01 16:22:34
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w911227

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by clx要棒棒的 at 2016-09-01 16:11:05
可是连mark也跑不开，mark说明书上建议分离胶的浓度是12%
...

这就费劲了，因为感觉要不叫胶浓度太大，要不就是电泳缓冲液有问题。
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苦难的日子终将逝去，但强者却永存
6楼2016-09-01 19:20:57
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周珍珍

新虫 (初入文坛)
mark也没有跑开，肯定胶浓度太大了

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7楼2016-09-02 12:53:48
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jqsce59
祝福
8楼2016-09-02 14:13:01
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MR_zang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议你拿着你自己的maker去别人的实验室的电泳系统跑跑看，就可以知道到底是不是你电泳的问题
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9楼2016-09-02 16:32:49
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wxy_0808

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
从描述和补充来看，问题很大可能出在制胶上，溶液需要过滤的进行过滤，催化剂新开一瓶，其他地方出问题不大。
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10楼2016-09-02 16:59:10
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