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田田den

新虫 (初入文坛)

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虫号: 3754140
注册: 2015-03-20
专业: 疫苗学

[求助] 目的片段胶回收后测序套峰且发现突变20多个bp，重复两次，发现突变位点一致

以质粒做模板PCR，目的片段700bp, 模板已测序没有问题，目的片段胶回收后测序测序结果是套峰且发现突变20多个bp，重复两次后，发现突变位点一致，
1.用的高保真酶，
2.切胶回收时紫外照射时间不太长，
Q:1.怀疑是不是引物有问题，因为当引物两边加上酶切位点以及保护碱基时PCR产物测序过没有问题，
2.引物GC含量比较高，但是设计的位点不能变动，因为要P全长，之后无缝连接到载体上

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