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ysk1989

新虫 (小有名气)

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[交流] 如何成功转染siRNA 已有1人参与

1.设计合成有效的siRNA

RNAi的核心需要 siRNA对相应mRNA进行有效的结合和作用。siRNA的设计合成首先很重要，最优的设计可以用最小的工作浓度取得满意的沉默效果，减少副反应的发生。siRNA的设计可以通过检索,优先选用经过验证的siRNA或设计多对siRNA。需要强调的是，需要同时设置阴性对照以排除非特异沉默现象和阳性对照以确认整个实验体系的有效性。

2.合成的siRNA注意纯度和工作浓度

siRNA的合成需要注意的是一定要选用高纯度的siRNA，siRNA的纯度直接关系到转染效率和沉默效率。siRNA的工作浓度和siRNA的设计、细胞种类、目标基因有关。建议一定进行相关的预实验优化各条件。

3.选择合适的siRNA转染试剂

选择合适的 siRNA转染试剂是的RNAi实验成功另一个关键。由于细胞毒性对siRNA实验的影响非常大，可以直接影响实验结论和结果，所以一定选择低毒性的转染试剂，看一个转染试剂毒性是否低，有一个简单的方法，看转染的过程和要求，比如要求的细胞密度越大，说明毒性越大，比如转染复合物容许和细胞孵育的时间越短，说明毒性越大。除了低毒性，还最好操作简便，越简单越好，比如有的转染试剂要求转染前换无血清培养基或低血清培养基，转染后又要有血清培养基，实际上，由于培养条件的频繁变化，可能会对细胞表达模式产生影响，对后续的mRNA和蛋白分析也同样产生影响，最终影响实验的可靠性。

EntransterTM-R siRNA专用转染试剂，采用先进的纳米聚合物成分，细胞毒性非常低，转染时细胞密度可以低至20％，同时可以有血清有抗生素转染，转染后无需换液，转染效率高，细胞毒性小，节约时间、精力和试剂，目前被许多著名实验室选用，是一款优秀的siRNA转染试剂。

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