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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 新人求助：如何构建真核共表达载体
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殊清

新虫 (初入文坛)

[求助] 新人求助：如何构建真核共表达载体 已有1人参与

如题，本人最近在构建抗体重轻链共表达载体，希望改造pOptiVEC载体，使抗体轻链也在这个载体上表达，不知有大神能否指点一二？本人是新手，不知这金币如何悬赏，也就是意思一下，还望各位不吝赐教
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1楼 2016-08-24 13:50:05
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siriusxuan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-26 09:17:59
两个读码之间加入IRES序列就可以实现，不需要改造载体吧，把三个片段融合一下就行了。
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此座可言轻社稷，江山万里起风尘。
2楼2016-08-25 17:21:19
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殊清

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by siriusxuan at 2016-08-25 17:21:19
两个读码之间加入IRES序列就可以实现，不需要改造载体吧，把三个片段融合一下就行了。

不好意思，回晚了
“两个读码之间加入IRES序列就可以实现”请问这个是什么意思，能画个示意图吗？类似于-CMV-HC-后面直接加一个IRES序列，再连接LC？那表达出来的不是融合蛋白？
   有个大神指导说把pOptiVEC载体TKPA序列后做个点突变，然后切开，再把pcDNA3.3的表达框整个切下来连进来
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3楼2016-09-09 08:58:11
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siriusxuan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 殊清 at 2016-09-09 08:58:11
不好意思，回晚了
“两个读码之间加入IRES序列就可以实现”请问这个是什么意思，能画个示意图吗？类似于-CMV-HC-后面直接加一个IRES序列，再连接LC？那表达出来的不是融合蛋白？
   有个大神指导说把pOptiVEC载体 ...

嗯，不是融合蛋白。 CMV-蛋白1-IRES-蛋白2-plA
两个蛋白的Orf都要带有终止密码子。
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此座可言轻社稷，江山万里起风尘。
4楼2016-09-09 11:28:31
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殊清

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by siriusxuan at 2016-09-09 11:28:31
嗯，不是融合蛋白。 CMV-蛋白1-IRES-蛋白2-plA
两个蛋白的Orf都要带有终止密码子。...

嗯。大致明白了，谢谢~
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5楼2016-09-09 17:33:56
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