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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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20110815

新虫 (初入文坛)

[求助] 老师您好!有个问题想向您请教,设计的引物退火温度60度,引物... 已有2人参与

老师您好!有个问题想向您请教,设计的引物退火温度60度,引物二聚体多,有没有什么办法能很好扩增目的基因? @biostar2009

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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-08-22 22:44:57
设计的引物扩增,做什么实验?有没有你的目标产物?如果是做一般的克隆实验,只要有你目标片段就行,不用管引物二聚体,如果是做定量实验,那可能得重新设计引物。
2楼2016-08-22 15:04:22
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20110815

新虫 (初入文坛)

老师,我是从动物组织中总RNA扩增目的基因,用pfu酶扩增,做下来没有目的条带,引物二聚体挺多 @biostar2009

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3楼2016-08-22 17:56:19
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20110815

新虫 (初入文坛)

4楼2016-08-22 17:58:22
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lxin_yu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
提高退火温度,减少引物二聚体。不过楼上说的也对,可以用primer5.0检查下引物自身的hairpin 和错配情况,如果错配或者发夹过多都会导致二聚体发生
5楼2016-08-24 17:06:23
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