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fengjunchen

铜虫 (小有名气)

[求助] 请问,如何得知一个肽链被水解的位点? 已有1人参与

最近在做一个蛋白水解酶的酶活实验,这个蛋白水解酶可以将特定的肽链作为底物水解掉。
我一开始认为这个“水解”,应该就是把目的肽链切碎了;不过从我的实验结果看,似乎只是切断而不是切碎,结合目的肽链的N端和C端的抗体看,切断的位点在靠近C端一侧。
然后,我想确定这个切断的位点到底在哪里?通过什么样的手段能够确定呢?
请各位前辈帮忙出出主意,谢谢~~
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-08-17 20:03:25
没做过此类实验。提供点思路看是否可行,①跑SDS-PAGE电泳,通过marker确定片段大小,根据序列氨基酸组成预测切割位点。②或者测定切割后产物的N端序列,比对原序列从而确定切割位点。
2楼2016-08-17 17:56:11
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