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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 关于蛋白结晶脱盐换buffer问题
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syfaf12345

新虫 (初入文坛)
已领完
关于蛋白结晶脱盐换buffer问题
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第一次做晶体。老板让结晶一个葡萄糖苷水解酶，His-tag，大小55kd…先用镍柱纯化，然后用pd10脱盐，从镍柱洗脱液更换为10mM Tris 20mM 氯化钠buffer。可从pd10脱盐柱接下来的蛋白液浓度大为稀释…从原来的2.7mg/ml直接变为0.4…这是什么情况？是不是buffer的盐浓度有问题？恳请大神解答一下疑惑。十分感谢！

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1楼 2016-08-16 23:36:47
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王艳华0113

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问你的蛋白分子量是55KDa的话，那该选用什么型号的填充料呢，G25对应的分子量是1000-5000.那分子量是55000岂不是无法洗脱下来
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8楼2018-07-11 14:17:58
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hc-material

专家顾问 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
G25脱盐，排阻色谱柱，过完柱子样品稀释了不很正常么
、
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7楼2016-08-17 14:14:43
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fulaishan6楼
2016-08-16 23:36   回复  
syfaf12345(金币+1): 谢谢参与
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nfer3楼
2016-08-16 23:36   回复  
syfaf12345(金币+1): 谢谢参与
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魑魅魍魉9222楼
2016-08-16 23:36   回复  
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小龙女9855楼
2016-08-16 23:36   回复  
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爱生活爱自由4楼
2016-08-16 23:36   回复  
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