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catalycis

铜虫 (正式写手)

[交流] SLAN扩增PCR曲线的问题

大家帮我看看,这个PCR曲线是怎么回事。


之前还好好的,今天把PCR扩增的延伸时间由45S缩短到30S,就变成这样了。

SLAN扩增PCR曲线的问题
延伸时间:35s.png


SLAN扩增PCR曲线的问题-1
延伸时间:45s.png
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catalycis

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 足下客 at 2016-08-16 13:56:47
没事,调一下基线就好了。可能是扩增条件或体系不是很好的原因吧。既然45s延伸的曲线很好,为什么要改成30s?

SLAN的机器,请问基线怎么调?
改成30S是希望缩短PCR时间的
3楼2016-08-17 15:09:21
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足下客

木虫 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-08-16 22:08:10
没事,调一下基线就好了。可能是扩增条件或体系不是很好的原因吧。既然45s延伸的曲线很好,为什么要改成30s?
2楼2016-08-16 13:56:47
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足下客

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
catalycis: 金币+3 2016-08-17 15:33:20
引用回帖:
3楼: Originally posted by catalycis at 2016-08-17 15:09:21
SLAN的机器,请问基线怎么调?
改成30S是希望缩短PCR时间的...

在软件操作界面的右方有一项  Optimization 先把这项选为Manual   再修改Baseline,Begin 和End的数值调整一下就可以了。 曲线先下弯,可以先试一下End 18 Begin 12。
最好不要让扩增曲线下弯,太难看了。而且Ct值也延后了,很明显的PCR条件不是最优。
4楼2016-08-17 15:19:59
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catalycis

铜虫 (正式写手)

好的,非常感谢。
5楼2016-08-17 15:33:09
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