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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » SLAN扩增PCR曲线的问题
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catalycis

铜虫 (正式写手)

[交流] SLAN扩增PCR曲线的问题

大家帮我看看，这个PCR曲线是怎么回事。


之前还好好的，今天把PCR扩增的延伸时间由45S缩短到30S，就变成这样了。

SLAN扩增PCR曲线的问题
延伸时间：35s.png


SLAN扩增PCR曲线的问题-1
延伸时间：45s.png
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1楼 2016-08-16 13:09:59
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足下客

木虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-08-16 22:08:10
没事，调一下基线就好了。可能是扩增条件或体系不是很好的原因吧。既然45s延伸的曲线很好，为什么要改成30s?
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2楼2016-08-16 13:56:47
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catalycis

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 足下客 at 2016-08-16 13:56:47
没事，调一下基线就好了。可能是扩增条件或体系不是很好的原因吧。既然45s延伸的曲线很好，为什么要改成30s?

SLAN的机器，请问基线怎么调？
改成30S是希望缩短PCR时间的
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3楼2016-08-17 15:09:21
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足下客

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
catalycis: 金币+3 2016-08-17 15:33:20
引用回帖:
3楼: Originally posted by catalycis at 2016-08-17 15:09:21
SLAN的机器，请问基线怎么调？
改成30S是希望缩短PCR时间的...

在软件操作界面的右方有一项  Optimization 先把这项选为Manual   再修改Baseline，Begin 和End的数值调整一下就可以了。 曲线先下弯，可以先试一下End 18 Begin 12。
最好不要让扩增曲线下弯，太难看了。而且Ct值也延后了，很明显的PCR条件不是最优。
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4楼2016-08-17 15:19:59
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catalycis

铜虫 (正式写手)
好的，非常感谢。
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5楼2016-08-17 15:33:09
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