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小慧xh

新虫 (初入文坛)

[求助] 二硫键的检测方法 已有1人参与

求二硫键的检测方法,具体特征峰是多少,谢谢
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新手已上路

木虫 (职业作家)

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冰点降温: 金币+3, 谢谢回帖交流,欢迎来无机物化版块。 2016-08-17 13:14:11
小慧xh(冰点降温代发): 金币+3 2016-08-17 13:14:17
现代生物质谱学在最近十年发展非常迅速,大为提高了对蛋白质分子的定性定量和翻译后修饰的分析能力。

APT结合蛋白质溶液内的非还原酶解和LC-MS/MS,对供试品的二硫键配对方式进行分析,明确供试品的各种链内和链间二硫键配对方式,并提供确定这些二硫键配对方式的实验证据,包括一级和二级质谱数据等。
本方法所检测的样品是蛋白质或多肽类供试品,测量的是二硫键所在多肽分子的分子量,测定的是该多肽分子的氨基酸序列和二硫键配对方式。蛋白质或者多肽供试品既可以是固体样品,也可以是溶液样品,供试品量不应少于200μg。供试品如果为固体,应为蛋白质多肽冻干制品;如果为液体,样品中蛋白质多肽浓度应尽可能在2mg/ml以上。

本方法检测是二硫键配对方式和其所在多肽分子的氨基酸序列。二硫键所在多肽分子的分子量与理论值相差小于2 Da,其二级碎片分子量与理论值相差小于0.8 Da。对还原前后的二硫键所在多肽分子做色谱质谱图分析(XICs),其信号峰面积需有显著差异。

二硫键测定方法所使用的仪器是,Thermo公司和GE公司生产的高校液相串联质谱仪LTQ-Velos质谱仪和Ettan MDLC色谱系统。
文武行
2楼2016-08-16 16:05:46
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新手已上路

木虫 (职业作家)

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冰点降温: 金币+1, 谢谢回帖交流,欢迎来无机物化版块。 2016-08-17 13:14:25
引用回帖:
2楼: Originally posted by 新手已上路 at 2016-08-16 16:05:46
现代生物质谱学在最近十年发展非常迅速,大为提高了对蛋白质分子的定性定量和翻译后修饰的分析能力。

APT结合蛋白质溶液内的非还原酶解和LC-MS/MS,对供试品的二硫键配对方式进行分析,明确供试品的各种链内和链 ...

rt
二硫键的检测方法
图为还原前后的蛋白质药物的二硫键分析图谱(XIC of LC-MS/MS)


二硫键的检测方法-1
图为蛋白质类供试品二硫键组成分析的MS/MS图谱

文武行
3楼2016-08-16 16:07:17
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