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二硫键的检测方法 已有1人参与
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| 求二硫键的检测方法，具体特征峰是多少，谢谢 |
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【答案】应助回帖
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冰点降温: 金币+3, 谢谢回帖交流，欢迎来无机物化版块。 2016-08-17 13:14:11
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现代生物质谱学在最近十年发展非常迅速，大为提高了对蛋白质分子的定性定量和翻译后修饰的分析能力。 APT结合蛋白质溶液内的非还原酶解和LC-MS/MS，对供试品的二硫键配对方式进行分析，明确供试品的各种链内和链间二硫键配对方式，并提供确定这些二硫键配对方式的实验证据，包括一级和二级质谱数据等。 本方法所检测的样品是蛋白质或多肽类供试品，测量的是二硫键所在多肽分子的分子量，测定的是该多肽分子的氨基酸序列和二硫键配对方式。蛋白质或者多肽供试品既可以是固体样品，也可以是溶液样品，供试品量不应少于200μg。供试品如果为固体，应为蛋白质多肽冻干制品；如果为液体，样品中蛋白质多肽浓度应尽可能在2mg/ml以上。 本方法检测是二硫键配对方式和其所在多肽分子的氨基酸序列。二硫键所在多肽分子的分子量与理论值相差小于2 Da，其二级碎片分子量与理论值相差小于0.8 Da。对还原前后的二硫键所在多肽分子做色谱质谱图分析（XICs），其信号峰面积需有显著差异。 二硫键测定方法所使用的仪器是，Thermo公司和GE公司生产的高校液相串联质谱仪LTQ-Velos质谱仪和Ettan MDLC色谱系统。 |
2楼2016-08-16 16:05:46
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