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SUB Cloning
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在做CPISPR Off-target analysis 时候用到了单克隆，载体是P-blunt载体，添加了3ul PCR产物和0.3ul 的载体，室温10min。感受态细胞冰上化冻后，与之前的混合物混在一起（没有轻弹混匀），在冰上20min,42度下热激30s，再在冰上3Min。加入500ul LB培养基。37度摇床1h。用的是卡钠选择培养基。之后送公司挑单克隆测序。 上述的步骤，除了没混匀就没什么错误了，培养了一晚，什么都没长出来。之前重复过好多次，要么长的量少，要么长不出。 本人是实验小白，请大神指教。 |
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