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playboy723金虫 (正式写手)
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[交流]
关于蛋白纯化酶切的问题
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各位虫友请教一个问题： 我用的是pet-32a载体 然后表达了几个蛋白，蛋白我可以表达出来，但我现在遇到的问题是我需要用凝血酶或者肠激酶将载体上自带的序列切下去，从而得到比较完整的目的蛋白，可在实际操作中无论我是将蛋白洗脱下切还是在柱上酶切都不能切下载体上自带的序列，很是奇怪 酶切时我是用的含Ca的酶切buffer啊 可怎么还切不开呢？（我最长切过48小时） 难道是咪唑能够抑制酶的活性？还是其他的什么原因 请各位高手帮我分析一下 太感激了 谢谢 或者哪位高手有其他成熟的方法 我愿意那金币换取 谢谢大家了 [ Last edited by 350784478 on 2009-10-26 at 18:56 ] |
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