| 查看: 1596 | 回复: 3 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
求waters HLB SPE小柱使用心得 已有2人参与
|
||
|
想处理细胞外液的盐然后进LC-MS。但是每次都做得很奇怪，有的时候都不成线性。。。。我用的是30μL的柱子，每次上样量是120μL，标曲最高点浓度是0.75μmol/ L。我使用的是别人用过的HBL柱子，活化柱子，分别用甲醇、水600μL，洗4次。上样前我会把水抽干，上样的时候样品不怎么好扩散，一直浮在柱子表面，我就抽啊，给抽下去，压力大概在0.2，wash用5%甲醇水1ML，也是得抽才能下去，我把水抽干以后，再上洗脱液（乙腈异丙醇1ML）。 不知道问题出在哪了，做了好久了，心塞啊啊啊啊啊啊啊啊 |
回复此楼» 猜你喜欢
拟解决的关键科学问题还要不要写
已经有7人回复
-
最失望的一年
已经有3人回复
-
存款400万可以在学校里躺平吗
已经有20人回复
-
国自然申请面上模板最新2026版出了吗？
已经有19人回复
-
请教限项目规定
已经有3人回复
-
基金委咋了？2026年的指南还没有出来？
已经有10人回复
-
基金申报
已经有6人回复
-
推荐一本书
已经有13人回复
-
疑惑？
已经有5人回复
-
溴的反应液脱色
已经有7人回复
Amily1002
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 3074.9
- 散金: 11
- 帖子: 127
- 在线: 87.8小时
- 虫号: 1081316
- 注册: 2010-08-24
- 性别: MM
- 专业: 药物分析
3楼2017-04-27 10:40:14
2楼2017-03-28 11:17:44
不想漂流
木虫 (小有名气)
- 应助: 24 (小学生)
- 金币: 2698.7
- 散金: 19
- 红花: 3
- 帖子: 235
- 在线: 136.3小时
- 虫号: 1238654
- 注册: 2011-03-19
- 性别: GG
- 专业: 天然药物化学
【答案】应助回帖
|
文献：Journal of Functional Foods 18 (2015) 344–357 2.4. Identification of the peptides by LC–MS/MS The sample preparation for HPLC analysis was performed according to procedures previously reported by our group with minor modifications (Wu et al., 2009). A homemade C18 solid-phase extraction (SPE) column was activated by 1 mL of ACN and washed with a 0.1% TFA aqueous solution (v/v). The hydrolysate solution was adjusted to pH 2.7 with 10% TFA in water (v/v) and was then loaded onto the SPE column. Desalting was then performed by loading 500μL of a 0.1% (v/v) TFA aqueous solution, and this desalting step was performed three times. The desalting was performed 3 times. Then, 1.2 mL of an aqueous solution containing 0.1% (v/v) TFA and 80% (v/v) ACN was used as an elution buffer (three times) to wash the peptides. The eluate was collected, lyophilized and stored at −80 °C until use. 建议仿照这篇文献，使用TFA水溶液溶解样品，再使用含TFA或FA的80%乙腈溶液进行洗脱，这样洗脱比较完全。 也最好不要使用旧的柱子，很可能会有上一次的残留。如果实在想用，不妨用含0.1%TFA的80%乙腈溶液进行洗涤，冲洗TFA后方可使用。（不过怀疑这样能行吗，SPE柱、HLB柱都是一次性的东西） 有人认为TFA会对质谱信息有干扰，近年来我们的做法渐渐把TFA改为FA。其实这两者差别都不大，因为进质谱前通常会用冻干机冻干掉乙腈和TFA。进质谱前再复溶，以获得准确的上样量。如果使用正离子模式，这个时候用请用FA复溶，以获得良好的质谱信号。 说了太多，不知能否看懂 |
4楼2017-04-28 14:41:54